金诃邦士片缓解体力疲劳功能的实验研究(1)
【摘 要】 目的：研究金诃邦士片缓解小鼠体力疲劳的作用。方法：选用昆明种小鼠为研究对象，用金诃邦士片0.17、0.33、1.00g/kg·bw剂量(分别相当于人体推荐剂量的5倍、10倍、30倍)分别给各组小鼠连续灌胃33d，测定各组小鼠负重游泳时间、血清尿素含量、肝糖原含量和血乳酸面积。结果：与阴性对照组比较，给予小鼠不同剂量的金诃邦士片，能显著延长小鼠负重游泳时间，减少疲劳小鼠血清尿素含量，降低游泳后小鼠血乳酸曲线下面积。结论：金诃邦士片具有缓解体力疲劳功能。
【关键词】 金诃邦士片;负重游泳;血清尿素;肝糖原;血乳酸
【中图分类号】R284.1
【文献标志码】A
【文章编号】 1005-0019(2019)14-063-01
金诃邦士片是以枸杞子提取物、淫羊藿提取物为主要原料，用以缓解体力疲劳的保健食品。配方中枸杞子含有胡箩卜素、维生素A、维生素C等多种维生素和钙、铁、锌等多种微量元素，有增强机体免疫功能、增强机体抵抗力、促进细胞新生、降低血中胆固醇含量、抗动脉粥样硬化、改善皮肤弹性、抗脏器及皮肤衰老等作用[1-4]。枸杞多糖(LBP) 作为补阴类中药枸杞的有效成分， 能够增加肝糖原、肌糖原贮备量， 提高运动前后血液乳酸脱氢酶(LDH) 的活力[5，6]。淫羊藿是我国传统补益类中药，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿以及提高免疫能力和抑制肿瘤等功效[7]，其含有的多糖成分，可以补充或延缓运动对内源性糖的消耗，从而有利于机体内糖原储备的提高[8]。中医药在缓解运动性疲劳方面已经显现出很大的优势，中药可通过加强机体抗氧化，清除自由基及减少机体由于疲劳引起的代谢产物堆积;或通过改善疲劳所致骨骼肌细胞超微结构改变、神经系统功能异常及调节免疫等发挥抗疲劳作用[9]。本实验以运动耐力训练大鼠为模型，研究金诃邦士片抗疲劳能力的影响。
1 材料与方法
1.1 受试样品
金诃邦士片由青海阿如拉藏医药研究开发有限公司提供，人体推荐剂量为2g/人·日(按60kg计)，批号：301P11060601。
1.2 实验动物及分组
选用军事医学科学院实验动物中心提供的SPF级健康KM种雄性小鼠200只，体重18～22g，动物生产许可证：SCXK-(军)2007-0004，实验动物饲养室温度为22-25℃，相对湿度控制在55%一70%，实验环境控制为12h白昼、12h黑夜。实验动物使用许可证号为SYXK(鲁)2008-0005。
实验动物共分为四批进行实验，每批随机分为4组，12只/组。实验一批进行负重游泳试验，实验二批进行血清尿素的测定，实验三批进行肝糖原的测定，实验四批进行血乳酸的测定。
1.3 仪器与试剂
755分光光度计(2002001)、YSI1500乳酸测定仪(2003001)、VITALAB SELECTRA-E型生化分析仪(2005001)、ES-1000E电子天平(2003004)、ES500HA电子天平(2005007)、BS223S电子天平(2008007)、离心机(98090)、振荡器、游泳箱、铅丝、加样器、匀浆器、具塞试管。
尿素氮试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号：110841)。破膜液(YSI公司，批号：07F100143)、缓冲液(YSI公司，批号：06IJI086)、乳酸标准液(YSI公司，批号：11G100082)、三氯醋酸(北京化学试剂公司，批号：010225)、葡萄糖(Amresco，批号：2734B53)、浓H2SO4(北京化工厂，批号：20110208)、蒽酮(中国医药集团上海化学试剂公司，批号：20031203)。
1.4 方法
金诃邦士片的推荐量为成人(按60kg体重计)每日2g，相当于0.033g/日/kg体重。实验设人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即每日0.17g/kg·bw、0.33g/kg·bw、1.00g/kg·bw为低、中、高剂量组。受试物以无菌水配制，每日一次经口给予，连续灌胃33天后测各项指标。小鼠灌胃体积为0.1ml/10g·bw。同时设一空白对照组(0g/kg·bw)，用无菌水代替受试物，每日灌胃体积与各受试物相同。各剂量组均给予基础饲料。参考卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中缓解体力疲劳功能检验方法[10]，实验结束进行各项抗疲劳指示的测定。
1.4.1 负重游泳实验
末次给小鼠受试物30min，将尾根部负荷5%体重铅丝的小鼠置于游泳箱中游泳。水深30cm，水温25.0℃±1.0℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠负重游泳时间游泳时间为计量资料，若受试物组游泳时间明显长于空白对照组游泳时间，且差异有显著性(P<0.05)，可判定该受试物有延長小鼠负重游泳时间的作用。
1.4.2 血清尿素测定
末次给小鼠受试物30min后，在温度为30℃的水中游泳90min，休息60min后立即拔眼球采血0.5ml。置4℃冰箱约3h，血凝固后2000r/min离心15min取VG血清。于VITALAB SELECTRA-E型生化分析仪上测定。
所得数据为计量资料，若受试物组血清尿素含量明显低于空白对照组，且差异有显著性(P<0.05)，可判定该受试物有减少疲劳小鼠尿素含量的作用。
1.4.3 肝糖原测定：蒽酮法
末次给小鼠受试物30min后，立即处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg，加入4mlTCA，匀浆1min，将匀浆液倒入离心管，以3000r/min离心15mim，取上清液0.5ml，加95%乙醇2ml，充分混匀至两种液体间不留有界面，用干净塞子塞上，室温下竖立放置过夜。次日以3000r/min离心15min。小心倒掉上清液并使试管倒立放置10min。用2ml蒸馏水溶解糖原待测。取0.25ml待测液和0.25ml葡萄糖标准液(50mg/dl)和0.375ml蒸馏水放入试管中，混匀。, 百拇医药(马文俊 刘有菊 韩成芳)
【关键词】 金诃邦士片;负重游泳;血清尿素;肝糖原;血乳酸
【中图分类号】R284.1
【文献标志码】A
【文章编号】 1005-0019(2019)14-063-01
金诃邦士片是以枸杞子提取物、淫羊藿提取物为主要原料，用以缓解体力疲劳的保健食品。配方中枸杞子含有胡箩卜素、维生素A、维生素C等多种维生素和钙、铁、锌等多种微量元素，有增强机体免疫功能、增强机体抵抗力、促进细胞新生、降低血中胆固醇含量、抗动脉粥样硬化、改善皮肤弹性、抗脏器及皮肤衰老等作用[1-4]。枸杞多糖(LBP) 作为补阴类中药枸杞的有效成分， 能够增加肝糖原、肌糖原贮备量， 提高运动前后血液乳酸脱氢酶(LDH) 的活力[5，6]。淫羊藿是我国传统补益类中药，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿以及提高免疫能力和抑制肿瘤等功效[7]，其含有的多糖成分，可以补充或延缓运动对内源性糖的消耗，从而有利于机体内糖原储备的提高[8]。中医药在缓解运动性疲劳方面已经显现出很大的优势，中药可通过加强机体抗氧化，清除自由基及减少机体由于疲劳引起的代谢产物堆积;或通过改善疲劳所致骨骼肌细胞超微结构改变、神经系统功能异常及调节免疫等发挥抗疲劳作用[9]。本实验以运动耐力训练大鼠为模型，研究金诃邦士片抗疲劳能力的影响。
1 材料与方法
1.1 受试样品
金诃邦士片由青海阿如拉藏医药研究开发有限公司提供，人体推荐剂量为2g/人·日(按60kg计)，批号：301P11060601。
1.2 实验动物及分组
选用军事医学科学院实验动物中心提供的SPF级健康KM种雄性小鼠200只，体重18～22g，动物生产许可证：SCXK-(军)2007-0004，实验动物饲养室温度为22-25℃，相对湿度控制在55%一70%，实验环境控制为12h白昼、12h黑夜。实验动物使用许可证号为SYXK(鲁)2008-0005。
实验动物共分为四批进行实验，每批随机分为4组，12只/组。实验一批进行负重游泳试验，实验二批进行血清尿素的测定，实验三批进行肝糖原的测定，实验四批进行血乳酸的测定。
1.3 仪器与试剂
755分光光度计(2002001)、YSI1500乳酸测定仪(2003001)、VITALAB SELECTRA-E型生化分析仪(2005001)、ES-1000E电子天平(2003004)、ES500HA电子天平(2005007)、BS223S电子天平(2008007)、离心机(98090)、振荡器、游泳箱、铅丝、加样器、匀浆器、具塞试管。
尿素氮试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号：110841)。破膜液(YSI公司，批号：07F100143)、缓冲液(YSI公司，批号：06IJI086)、乳酸标准液(YSI公司，批号：11G100082)、三氯醋酸(北京化学试剂公司，批号：010225)、葡萄糖(Amresco，批号：2734B53)、浓H2SO4(北京化工厂，批号：20110208)、蒽酮(中国医药集团上海化学试剂公司，批号：20031203)。
1.4 方法
金诃邦士片的推荐量为成人(按60kg体重计)每日2g，相当于0.033g/日/kg体重。实验设人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即每日0.17g/kg·bw、0.33g/kg·bw、1.00g/kg·bw为低、中、高剂量组。受试物以无菌水配制，每日一次经口给予，连续灌胃33天后测各项指标。小鼠灌胃体积为0.1ml/10g·bw。同时设一空白对照组(0g/kg·bw)，用无菌水代替受试物，每日灌胃体积与各受试物相同。各剂量组均给予基础饲料。参考卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中缓解体力疲劳功能检验方法[10]，实验结束进行各项抗疲劳指示的测定。
1.4.1 负重游泳实验
末次给小鼠受试物30min，将尾根部负荷5%体重铅丝的小鼠置于游泳箱中游泳。水深30cm，水温25.0℃±1.0℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠负重游泳时间游泳时间为计量资料，若受试物组游泳时间明显长于空白对照组游泳时间，且差异有显著性(P<0.05)，可判定该受试物有延長小鼠负重游泳时间的作用。
1.4.2 血清尿素测定
末次给小鼠受试物30min后，在温度为30℃的水中游泳90min，休息60min后立即拔眼球采血0.5ml。置4℃冰箱约3h，血凝固后2000r/min离心15min取VG血清。于VITALAB SELECTRA-E型生化分析仪上测定。
所得数据为计量资料，若受试物组血清尿素含量明显低于空白对照组，且差异有显著性(P<0.05)，可判定该受试物有减少疲劳小鼠尿素含量的作用。
1.4.3 肝糖原测定：蒽酮法
末次给小鼠受试物30min后，立即处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg，加入4mlTCA，匀浆1min，将匀浆液倒入离心管，以3000r/min离心15mim，取上清液0.5ml，加95%乙醇2ml，充分混匀至两种液体间不留有界面，用干净塞子塞上，室温下竖立放置过夜。次日以3000r/min离心15min。小心倒掉上清液并使试管倒立放置10min。用2ml蒸馏水溶解糖原待测。取0.25ml待测液和0.25ml葡萄糖标准液(50mg/dl)和0.375ml蒸馏水放入试管中，混匀。, 百拇医药(马文俊 刘有菊 韩成芳)