盲样菌株微生物室质控考核探讨
【摘 要】 目的：提高实验室检测能力及检验员检验水平。方法：按照GB 4789.4-2010对考核盲样进行检测。结果：此2份考核盲样中检出 1号菌为福氏志贺氏菌，2号菌为肠炎沙门氏菌。结论：增强了微生物实验室的检验微生物的技术水平，促进质量检验控制水平的的不断提高。
【中图分类号】R691.4
【文献标志码】A
【文章编号】1005-0019(2020)22-250-01
微生物检测的质量控制，是实验室内检测工作的基础，直接关系到细菌学检测结果的准确性和可靠性。通过质控考核提高微生物实验室检测能力，检验人员技术水平，增强实验室竞争力。近年来，随着本实验室多次参加国家、自治区、市举办的微生物检验技术的质量考核， 通过多次的质量考核，我们实验室不仅在微生物检验的质量考核中取得不错的成绩，而且每一次的质量考核让我们实验室从中认识自身的不足，总结近年来参加质量考核所总结得一些经验，现今把近年来参加微生物实验室质控考核的结果报道如下：
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1 试验资料
1.1 材料与方法
1.1.1 标本来源 由国家，自治区疾病预防控制中心所下发的考核盲样 ( 菌株)
1.1.2 仪器设备 VITEK-2，恒温培养箱，显微镜
1.1.3 检测试剂 缓冲蛋白胨水，7.5%氯化钠肉汤，LB增菌液，GN增菌液，1%葡萄糖肉汤，3%氯化钠碱性蛋白胨水，mLST-Vm 增菌液，mEC肉汤，Bolton肉汤，CIN-1平板，skirrow琼脂平板，DGI琼脂平板，B-P平板，MYP平板，伊红美兰(EMB)平板，SS平板，HE平板，沙门显色平板，XLD平板，三糖铁琼脂，生化反应微量管，G染色液，血琼脂平板以上所用到的检验用品均是购自北京陆桥微生物科技有限公司，在有效使用期内的检验用品，另外的生理盐水本实验室所自行配制。
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1.1.4 分离培养与鉴定 根据《 中华人民共和国国家标准 ( 食品卫生微生物学检验) 》 的标准( GB 4789— 2003/GB 4789—2010) 〔1〕，本实验室对盲样微生物标本进行分离以及培养和最终的鉴定。所有操作均在BSL-2生物安全实验室或万级净化实验室进行，注意生物安全和无菌操作。
1.1.5 标准菌株 沙门氏菌;志贺氏菌群 ;金黄色葡萄球菌
1.2 检测程序
1.2.1 增菌的方法 首先通过一次性无菌接种针将考核盲样样品转移到常规的营养肉汤中，观察其中常规营养肉汤的温度恒定在(36士1 ) ℃，观察时间是24小时，同时在未增菌培养时，挑取稀释的样品在HE平板和SS平板上先进行分离培养。
1.2.2 分离的方法 在采用无菌操作的情况下，分段画法于SS平板、HE平板、琼脂平板、EMB平板、沙门显色平板、XLD平板等各类平板，温度均保持在(36±1)℃。培养24小时，平板上出现单个菌落。
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1.2.3 单个菌落挑取三糖铁的同时进行营养琼脂纯培养。
1.2.4 纯培养的菌落进行革兰氏染色，同时上VITEK-2
2 结果
2.1 增菌 有較为浑浊的液体在增菌管中生长。
2.2 分离培养 在第一天的SS平板和HE平板上出现无色，光滑，凸起的菌落，比增菌后的菌落纯度更高，我们定为1号菌。XLD平板和沙门显色平板上观察到光滑湿润，产H2S的中等大小菌落，我们定为2号菌。
2.3 染色 采用的是革兰氏染色，从纯培养的营养琼脂平板上进行，其染色的结果：此两种菌均为革兰氏染色阴性杆菌
2.4 生化反应 1号菌三糖铁乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气，呈现上红下黄，无动力;2号菌上红下黑，有动力，上VITEK-2结果99%的符合度。1号菌为志贺氏菌属;2号菌为沙门氏菌属。
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2.5 血清凝集
1号菌志贺氏菌四多价(+++)，福多价血清凝集(+++)，Ⅰ型(+++)，群3，4(+++)
2号菌A-F多价O抗原(+++)，O9(+++)，H抗原鉴定第一相g、m(+++)生理盐水对照(-)。
2.6 检测结果 1号菌：福氏志贺氏菌1a;2号菌：肠炎沙门氏菌。
3 讨论
通过本次试验认为在今后的检测过程中需要注意方面如下：
(1) 严格做好室内质量控制是前提，用标准菌株进行质量监测，确保实验结果可靠。同时对菌落形态大小，生化反应更有直观的体现。(2)增菌：通过上述的检测的方法，可以得出通过增菌进行培养的细菌在24小时内生长，并且大多数菌生长良好，但对于志贺氏菌这类的生长能力弱的细菌，容易在增菌的过程被其他优势菌掩盖，因此在未增菌前进行分离培养效果更好。(3)分离培养 在本次试验检测中的优势菌群是沙门菌，志贺氏菌不仅数量较少，而且菌的大小也小，在实验过程中容易被掩盖，被漏检，给参加质控考核的实验室增加一定的难度，不仅在质控考核中，即使在我们日常的细菌菌株的检测中也应该认真仔细的操作，把握好检测的过程，只有在把参加质控考核的态度与日常的工作结合，仔细的完成每一个步骤，提高微生物的检出率。(4)实验过程中应做好消毒质量控制。(5)微生物在不断的变化，一些新的菌种在不断的出现，测定技术不断更新和多样化，因此作为检测人员必须不断进行知识更新学习。
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综上所述，盲样菌株微生物室间质控考核的评定，主要的目的是评定实验室检测微生物细菌水平的对比。也是计量认证和国家实验室认可的特定要求[2-5]，最重要是观察实验室通过参加质控考核所取得强化室内质量控制效果，从而不断提高自己的检测水平，通过参加举办的微生物室问的质量控制考核，发现了微生物实验室检验水平的不足，增强了微生物实验室的检验微生物的技术水平，促进质量检验控制水平的的不断提高。
参考文献
[1] GB4789-2003/GB 4789—2010.中华人民共和国国家标准(食品卫生微生物学检验)[s]
[2] 杨一明，微生物质控考核样品的检测分析与探讨[J].检验医学与临床，2011.8(23)：2941-2942
[3] 吴晓慧，马翠琴，吴慧琴，等.对微生物考核盲样的探讨 [J].中国卫生检验杂志，2014.24(21)：3189-3190
[4] 王滨，高景枝，董雪，等.细菌盲样质控考核体会[J].中国卫生检验杂志，2013.23(15)：3157-3158
[5] 王滨，高景枝，杨康，等.2012十堰市肠道细菌分离鉴定能力考核结果分析[J].中国卫生检验杂志，2013.23(16)：1398-1399, http://www.100md.com(王超 杨毅)
【中图分类号】R691.4
【文献标志码】A
【文章编号】1005-0019(2020)22-250-01
微生物检测的质量控制，是实验室内检测工作的基础，直接关系到细菌学检测结果的准确性和可靠性。通过质控考核提高微生物实验室检测能力，检验人员技术水平，增强实验室竞争力。近年来，随着本实验室多次参加国家、自治区、市举办的微生物检验技术的质量考核， 通过多次的质量考核，我们实验室不仅在微生物检验的质量考核中取得不错的成绩，而且每一次的质量考核让我们实验室从中认识自身的不足，总结近年来参加质量考核所总结得一些经验，现今把近年来参加微生物实验室质控考核的结果报道如下：
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1 试验资料
1.1 材料与方法
1.1.1 标本来源 由国家，自治区疾病预防控制中心所下发的考核盲样 ( 菌株)
1.1.2 仪器设备 VITEK-2，恒温培养箱，显微镜
1.1.3 检测试剂 缓冲蛋白胨水，7.5%氯化钠肉汤，LB增菌液，GN增菌液，1%葡萄糖肉汤，3%氯化钠碱性蛋白胨水，mLST-Vm 增菌液，mEC肉汤，Bolton肉汤，CIN-1平板，skirrow琼脂平板，DGI琼脂平板，B-P平板，MYP平板，伊红美兰(EMB)平板，SS平板，HE平板，沙门显色平板，XLD平板，三糖铁琼脂，生化反应微量管，G染色液，血琼脂平板以上所用到的检验用品均是购自北京陆桥微生物科技有限公司，在有效使用期内的检验用品，另外的生理盐水本实验室所自行配制。
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1.1.4 分离培养与鉴定 根据《 中华人民共和国国家标准 ( 食品卫生微生物学检验) 》 的标准( GB 4789— 2003/GB 4789—2010) 〔1〕，本实验室对盲样微生物标本进行分离以及培养和最终的鉴定。所有操作均在BSL-2生物安全实验室或万级净化实验室进行，注意生物安全和无菌操作。
1.1.5 标准菌株 沙门氏菌;志贺氏菌群 ;金黄色葡萄球菌
1.2 检测程序
1.2.1 增菌的方法 首先通过一次性无菌接种针将考核盲样样品转移到常规的营养肉汤中，观察其中常规营养肉汤的温度恒定在(36士1 ) ℃，观察时间是24小时，同时在未增菌培养时，挑取稀释的样品在HE平板和SS平板上先进行分离培养。
1.2.2 分离的方法 在采用无菌操作的情况下，分段画法于SS平板、HE平板、琼脂平板、EMB平板、沙门显色平板、XLD平板等各类平板，温度均保持在(36±1)℃。培养24小时，平板上出现单个菌落。
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1.2.3 单个菌落挑取三糖铁的同时进行营养琼脂纯培养。
1.2.4 纯培养的菌落进行革兰氏染色，同时上VITEK-2
2 结果
2.1 增菌 有較为浑浊的液体在增菌管中生长。
2.2 分离培养 在第一天的SS平板和HE平板上出现无色，光滑，凸起的菌落，比增菌后的菌落纯度更高，我们定为1号菌。XLD平板和沙门显色平板上观察到光滑湿润，产H2S的中等大小菌落，我们定为2号菌。
2.3 染色 采用的是革兰氏染色，从纯培养的营养琼脂平板上进行，其染色的结果：此两种菌均为革兰氏染色阴性杆菌
2.4 生化反应 1号菌三糖铁乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气，呈现上红下黄，无动力;2号菌上红下黑，有动力，上VITEK-2结果99%的符合度。1号菌为志贺氏菌属;2号菌为沙门氏菌属。
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2.5 血清凝集
1号菌志贺氏菌四多价(+++)，福多价血清凝集(+++)，Ⅰ型(+++)，群3，4(+++)
2号菌A-F多价O抗原(+++)，O9(+++)，H抗原鉴定第一相g、m(+++)生理盐水对照(-)。
2.6 检测结果 1号菌：福氏志贺氏菌1a;2号菌：肠炎沙门氏菌。
3 讨论
通过本次试验认为在今后的检测过程中需要注意方面如下：
(1) 严格做好室内质量控制是前提，用标准菌株进行质量监测，确保实验结果可靠。同时对菌落形态大小，生化反应更有直观的体现。(2)增菌：通过上述的检测的方法，可以得出通过增菌进行培养的细菌在24小时内生长，并且大多数菌生长良好，但对于志贺氏菌这类的生长能力弱的细菌，容易在增菌的过程被其他优势菌掩盖，因此在未增菌前进行分离培养效果更好。(3)分离培养 在本次试验检测中的优势菌群是沙门菌，志贺氏菌不仅数量较少，而且菌的大小也小，在实验过程中容易被掩盖，被漏检，给参加质控考核的实验室增加一定的难度，不仅在质控考核中，即使在我们日常的细菌菌株的检测中也应该认真仔细的操作，把握好检测的过程，只有在把参加质控考核的态度与日常的工作结合，仔细的完成每一个步骤，提高微生物的检出率。(4)实验过程中应做好消毒质量控制。(5)微生物在不断的变化，一些新的菌种在不断的出现，测定技术不断更新和多样化，因此作为检测人员必须不断进行知识更新学习。
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综上所述，盲样菌株微生物室间质控考核的评定，主要的目的是评定实验室检测微生物细菌水平的对比。也是计量认证和国家实验室认可的特定要求[2-5]，最重要是观察实验室通过参加质控考核所取得强化室内质量控制效果，从而不断提高自己的检测水平，通过参加举办的微生物室问的质量控制考核，发现了微生物实验室检验水平的不足，增强了微生物实验室的检验微生物的技术水平，促进质量检验控制水平的的不断提高。
参考文献
[1] GB4789-2003/GB 4789—2010.中华人民共和国国家标准(食品卫生微生物学检验)[s]
[2] 杨一明，微生物质控考核样品的检测分析与探讨[J].检验医学与临床，2011.8(23)：2941-2942
[3] 吴晓慧，马翠琴，吴慧琴，等.对微生物考核盲样的探讨 [J].中国卫生检验杂志，2014.24(21)：3189-3190
[4] 王滨，高景枝，董雪，等.细菌盲样质控考核体会[J].中国卫生检验杂志，2013.23(15)：3157-3158
[5] 王滨，高景枝，杨康，等.2012十堰市肠道细菌分离鉴定能力考核结果分析[J].中国卫生检验杂志，2013.23(16)：1398-1399, http://www.100md.com(王超 杨毅)