乙肝五项(ELISA)手工操作法的假阳性与假阴性的分析及对策
乙肝检测中经常会出现假阳或假阴性的结果，这种情况是我们检验工作中经常会遇到的问题，也是科室与患者纠纷最多的问题。患都不明白什么是假阳性和假阴性，只知在这家医院做出了阳性结果，就到其他医院或上级医院再做，如果出现结果不一样就找院领导和检验室索赔。上述的问题是我们工作中问题还是患者自身的问题，难道不能避免吗？因此，在工作中我们用酶联免疫法(ELISA)一步法，结合病人所反应的情况，我们对1800份血样标本进行了分析，现报告如下：
1 外源性因素
1.1 标本因素 ①标本应防止溶血，脂血，细茵污染，血样标本和脂血严重都会造成结果错误，被污染的标本因菌体中可能含有辣根过氧化物酶，在测定中会导致非特异显色。②标本最好采集后就做，不要放置冰箱内保存过久，因为血清中IgG可聚合成多聚体，可造成假阳性。此外标本在冰箱内放置过久抗原和抗体的免疫活性减弱，也可造成假阳性。③采集后必须使其充分凝固后再分离，以保证血清中不含有纤维蛋白原，以防造成假阳性结果。④另外反复冻融也可造成假阳性。
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1.2 操作因素 ①操作者要高度的责任精神，操中作中要精力集中，标本不要张冠李戴，要做好操作前的校对工作。②试剂准备。从冰箱取出试剂后要与室温平衡后才能使用，一般为半小时平衡，所用去离子水应保证质量。③熟练掌握操作规程和操作注意事项。Ⅰ加样枪在加样过程中不可太快，以免吸入气体引起空泡，另外，建议用一次性的吸头，加样器要经常清洗，定期校对。Ⅱ加入试剂前要充分混匀，，弃去两滴，要注意加入的角度，速度，以免多加或少加，和加入两孔之间，这样在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异性显色。Ⅲ检测水浴箱的温度是否在37℃水温中，酶联免疫吸附(ELISA)试验中的酶对温度是很敏感的，温度太高会使酶失去活性，太低反应又不完全。Ⅳ洗板要彻底，如不彻低，未去除实验中没参与反应的酶类物质，可造成假阳性和假阴性。Ⅴ有时我们加样过程中会遇到标本未离心情况，为节约时间，往往这时我们会加酶结合物，然后等标本分离后再加入样本，殊不知这样，竟也会造成假阳性和假阴性，因为HBsAb和HBcAb都是竟争抑制法，如先加入酶标记的标本，首先与固相载体上的抗原结合，待加入显色剂后，因酶的存在而显色，故呈阴性。Ⅵ KOOH效应，随着ELISA的应用，一些标本中的抗原过高，产生KOOH效应，影响检验结果，采用同步稀释测定或使用线性范围高的两对半定量法可减少KOOH反应的发生。
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2 内源性的影响
2.1 药物的影响 I 抗病毒药物可清除血液中病毒，故有时检测表现为阴性。但对器官组织骨髓，肝脏里的病毒效果差，故停药后检测为阳性。
2.2 患者自身因素 主要是患者体内含有一些非特异性的干扰物质，较常见的有：嗜异性抗体、补体、类风湿因子等，这些物质在二对半操作中都能与酶标记的第二抗体Fc段结合，从而导致假阳性结果。
2.3 高效价的免疫球蛋白与HBsAg形成复合物，影响HBeAg的检出，所以一些HBsAg阳性患者注射免疫球蛋白后，HBsAg检测会呈现阴性反应。
因此，提高检测的准确性，减少假阳性，假阴性反应的发生，以免给患者家属带来物质和精神上的损失，给临床确诊带来麻烦，必须排除各种影响因素的干扰，以有利于患者的早发现，早诊断，而采取必要的防护措施，降低乙肝感染率。, http://www.100md.com(陈俊荣 谢玉文 汪健)
1 外源性因素
1.1 标本因素 ①标本应防止溶血，脂血，细茵污染，血样标本和脂血严重都会造成结果错误，被污染的标本因菌体中可能含有辣根过氧化物酶，在测定中会导致非特异显色。②标本最好采集后就做，不要放置冰箱内保存过久，因为血清中IgG可聚合成多聚体，可造成假阳性。此外标本在冰箱内放置过久抗原和抗体的免疫活性减弱，也可造成假阳性。③采集后必须使其充分凝固后再分离，以保证血清中不含有纤维蛋白原，以防造成假阳性结果。④另外反复冻融也可造成假阳性。
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1.2 操作因素 ①操作者要高度的责任精神，操中作中要精力集中，标本不要张冠李戴，要做好操作前的校对工作。②试剂准备。从冰箱取出试剂后要与室温平衡后才能使用，一般为半小时平衡，所用去离子水应保证质量。③熟练掌握操作规程和操作注意事项。Ⅰ加样枪在加样过程中不可太快，以免吸入气体引起空泡，另外，建议用一次性的吸头，加样器要经常清洗，定期校对。Ⅱ加入试剂前要充分混匀，，弃去两滴，要注意加入的角度，速度，以免多加或少加，和加入两孔之间，这样在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异性显色。Ⅲ检测水浴箱的温度是否在37℃水温中，酶联免疫吸附(ELISA)试验中的酶对温度是很敏感的，温度太高会使酶失去活性，太低反应又不完全。Ⅳ洗板要彻底，如不彻低，未去除实验中没参与反应的酶类物质，可造成假阳性和假阴性。Ⅴ有时我们加样过程中会遇到标本未离心情况，为节约时间，往往这时我们会加酶结合物，然后等标本分离后再加入样本，殊不知这样，竟也会造成假阳性和假阴性，因为HBsAb和HBcAb都是竟争抑制法，如先加入酶标记的标本，首先与固相载体上的抗原结合，待加入显色剂后，因酶的存在而显色，故呈阴性。Ⅵ KOOH效应，随着ELISA的应用，一些标本中的抗原过高，产生KOOH效应，影响检验结果，采用同步稀释测定或使用线性范围高的两对半定量法可减少KOOH反应的发生。
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2 内源性的影响
2.1 药物的影响 I 抗病毒药物可清除血液中病毒，故有时检测表现为阴性。但对器官组织骨髓，肝脏里的病毒效果差，故停药后检测为阳性。
2.2 患者自身因素 主要是患者体内含有一些非特异性的干扰物质，较常见的有：嗜异性抗体、补体、类风湿因子等，这些物质在二对半操作中都能与酶标记的第二抗体Fc段结合，从而导致假阳性结果。
2.3 高效价的免疫球蛋白与HBsAg形成复合物，影响HBeAg的检出，所以一些HBsAg阳性患者注射免疫球蛋白后，HBsAg检测会呈现阴性反应。
因此，提高检测的准确性，减少假阳性，假阴性反应的发生，以免给患者家属带来物质和精神上的损失，给临床确诊带来麻烦，必须排除各种影响因素的干扰，以有利于患者的早发现，早诊断，而采取必要的防护措施，降低乙肝感染率。, http://www.100md.com(陈俊荣 谢玉文 汪健)