含氯消毒剂对酶联免疫法结果的影响
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【摘要】目的 探讨含氯消毒剂对酶联免疫法结果的影响。方法 夹心ELISA法(以乙肝表面抗原试剂进行实验) 以自带阴性及临界值阳性血清进行实验，各步按说明书进行操作,加完标本后同时加入5μl的0.1%的84液。竞争ELISA法(以HBcAb试剂进行实验) 各孔中加入自带阳性及临界值阴性血清，按说明书进行操作,加完标本后同时加入5UL的0.1%的84液，以全自动酶标仪进行比色，取吸光度的均值，按说明书判断结果。结果 消毒剂对HBsAg临界值阳性血清检测结果的影响是：使吸光度OD值及S/CO值降低，结果由临界值阳性转变为阴性。对竞争ELISA的临界值阴性标本检测结果的影响是：使吸光度OD值及S/CO值降低，结果由临界值阴性转变为临界值阳性；从而是的结果出现假阴性、假阳性。
中图分类号：R446 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2011)4-377-02
对酶联免疫实验的影响因素很多包括所测标本中内源性干扰物如：类风湿因子、黄疸等，外源性干扰物如：标本处理不当造成的样品溶血，被细菌污染，标本凝集不全等，都会造成实验结果的假阴性、假阳性[1-4]。我们在工作过程中发现消毒剂对实验也有一定的影响；检验科对污物和地面、台面的消毒，用得最多的是含氯的消毒剂—84液。它对实验结果的影响是怎样的，是一项值得探讨的问题。我们通过试验得出，它对酶联免疫试验结果具有一定的影响的。
1 试剂和仪器
所用试剂是由厦门英科新创生物有限公司提供的试剂盒；科华酶标仪；自配的0.1%的84液。
2 方法
2.1 夹心ELISA法(以乙肝表面抗原试剂进行实验) 以自带阴性及临界值阳性血清进行实验，各步按说明书进行操作,加完标本后同时加入5μl的0.1%的84液。对照孔加入蒸馏水5μl，各浓度平行做3孔，加入酶标液，37℃加温30分钟，洗板，加底物和显色液，加温10分钟，取出加入终止液，以全自动酶标仪进行比色，取吸光度的均值，按说明书判断结果。
2.2 竞争ELISA法(以HBcAb试剂进行实验) 各孔中加入自带阳性及临界值阴性血清，按说明书进行操作,加完标本后同时加入5UL的0.1%的84液，对照孔加入蒸馏水5μl，各浓度平行做3孔，取吸光度的均值。按说明书判断结果。
2.3 通常工作中我们以Cutoff值的10%为临界值
3 结果
3.1 HBsAg阳性血清稀释后检测的各孔吸光度见表中，可见:1∶64稀释度的吸光度符合临界值要求(吸光度在阳性结果Cutoff值0.105以上)见表1
3.2 1∶64稀释HBsAg阳性血清，加入84液后，实验至加入显色剂，测得三个平行孔的吸光度变化，见表2
由表可见 消毒剂对HBsAg临界值阳性血清检测结果的影响是：使吸光度OD值及S/CO值降低，结果由临界值阳性转变为阴性。
3.3 消毒剂对HBcAb阴性血清检测结果的影响 对HBcAb阳性血清进行一系列稀释，寻找合适的稀释度，结果见表3。
HBcAb阳性血清稀释度及吸光度由表3中可见:1∶8稀释度符合要求(吸光度大于临界值0.316)
3.4 以HBcAb阳性血清进行1∶8稀释(其结果为临界值阴性)进行平行三孔实验，测得加入84液前后的吸光度值。结果见表4。
表4可见消毒剂对竞争ELISA的临界值阴性标本检测结果的影响是：使吸光度OD值及S/CO值降低，结果由临界值阴性转变为临界值阳性
4 讨论
检验科是临床医生的侦察兵，为临床提供准确有效的实验结果是我们检验人员的职责。在实验过程中,由于各种因素的影响，都会造成结果的不真实性，从而影响了临床的诊断，造成对病人误诊或漏诊。因此，了解各种因素对实验结果的影响是很有必要性的。我们通过对84液对酶联免疫法结果的实验，知道消毒液对这实验方法有影响，它可使夹心法的弱阳性结果变成阴性，使竞争法的弱阴性结果变成阳性。这与原有的报道有点出入[5]可能是实验方法中加入消毒液的步骤不一样引起的，报道的是在最后显色时加入，而我们是在加入标本时同时加入的。因此，影响的结果不一样。
由于氯离子是卤素原子，化学性质活泼，具有氧化的作用，它与酶分子中的氨基或羧基起反应使得酶活性受到抑制，[6]不能完全催化底物发生显色反应，致使临界OD值及S/CO降低。这样，夹心法的弱阳性结果标本就会变成阴性，竞争法的弱阴性结果标本就会变成阳性，出现了假性结果，给病人造成不同程度的伤害，给医生造成疾病的误诊；严重时还会给医院造成医疗纠纷。因此，应当引起足够的重视。为了避免类此情况的发生，我们采取了一系列的措施：抽血用的试管和加样用的吸样头尽量用一次性的，假如为了节省成本，要重复使用时，每次清洗干净后要用蒸馏水侵泡两小时以上再烘干使用。这样可预防98%以上的假性结果。
参考文献
[1]范旭.酶联免疫吸附试验检测误差因素及解决方法.检验医学与临床 2009；6(24)2167.
[2]汪永红；李军；王昌富；等，温育和洗板方式对ELISA测定结果的影响 ......
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