天津地区患有宫颈疾病妇女感染人乳头状瘤病毒情况研究
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【摘要】目的 了解天津地区患有宫颈疾病妇女感染人乳头状瘤病毒(HPV)的情况, 为本地区HPV感染情况提供流行病学数据。方法 2009年3月~2010年8月利用导流杂交基因分型技术对514例来自天津地区的宫颈疾病患者行HPV筛查，研究本地区HPV感染的特点。结果 HPV感染率为48.8%(251/514),多重感染率为17.8%(92/514)。共检出315项HPV亚型，其中高危亚型感染率为60.3%(190/315)，优势高危亚型为16、18、58，低危亚型感染率为32.4%(102/315)，优势低危亚型为11、6。感染高峰在25～29岁, 40～44岁就明显下降。不同宫颈疾病优势亚型不同。结论 天津地区宫颈疾病妇女HPV感染率较高, 亚型分布、感染高峰年龄及不同宫颈疾病优势亚型具有一定的地域特点。
【关键词】宫颈疾病 人乳头状瘤病毒 基因亚型 感染
中图分类号：R737.33 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2011)5-151-02
人乳头瘤病毒(Human papillomaviruses，HPV)是一种具有种属特异性的无包膜小DNA病毒，包含约8000个碱基，可致人类皮肤和黏膜异常增生。通过大量流行病学资料结合实验室的证据现已明确HPV感染是宫颈上皮内瘤变和浸润性宫颈癌发生的必要条件[1]。不同国家和地区,感染HPV的情况均已有研究[2] 。目前有关本地区的HPV在宫颈疾病妇女中的研究无相关报道, 笔者拟对此进行观察, 为本地区HPV 研究提供流行病学数据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 临床标本
来自于本院妇科2009年3月~2010年8月送检的宫颈疾病患者514例，主要来自天津市内四区及附近的周边郊区，年龄17~58岁，平均年龄(34.3 ±5.8)岁。
1.1.2 仪器与试剂
GeneAmp PCR System9600 PCR扩增仪(美国PE公司)。DNA 提取试剂盒、PCR扩增试剂盒、杂交试剂盒及HybriMax医用核酸分子快速杂交仪由广东凯普生物科技股份有限公司生产。
1.2 方法
1.2.1 标本的采集
HPV筛查标本取样步骤和要求按宫颈细胞学取材常规进行,采集标本放在盛有细胞保存液的小瓶中,4℃保存，一周内检测。
1.2.2 标本DNA的提取
取样本管中宫颈细胞悬浮液500μl，14000rpm离心5分钟，弃上清液后，用DNA 提取试剂盒提取标本HPV DNA。
1.2.3 PCR扩增
按每管23.25μl PCR mix、0.75μl Taq酶、1μl标本DNA溶液混匀后进行扩增。PCR反应条件：20℃预处理10min，95℃预变性9min，95℃20s，55℃30s，72℃30s，共40个循环，72℃延伸5min。每批同时扩增HPV阳性对照和阴性对照各一份。
1.2.4 杂交
PCR扩增产物经95℃变性5min后直接放入冰水混合物中冰浴至少2min，按照凯普公司杂交试剂盒说明书进行杂交。
1.2.5 结果判断
杂交完毕后，利用肉眼观察，按照基因芯片上HPV亚型分布相应着色点位判断结果，HPV分型阳性点呈紫色圆点，有两个或以上阳性点属多重感染，每张芯片设有反应质控点和杂交显色质控点各一个，以保证结果的真实可信性。
1.3 统计学方法
使用SPSS11.0进行数据统计分析，采用X2检验。
2 结果
2.1 感染阳性率
514例门诊就诊患者中共查出251例HPV阳性患者，感染阳性率为48.8%。
2.2 感染基因类型
在251例阳性患者中，共检出315项亚型，21种检测亚型被检测出19种，其中低危亚型占阳性标本的32.4%，按所占比例多少分别列出如下：11型(62例，19.7%)，6型(37例,11.8%)，43型(2例，0.6%)，44型(1例，0.3%)，未检出42型；高危亚型占阳性标本的60.3%，按所占比例多少分别列出如下，16型(39例，12.4%)，18型(32例，10.2%)，58型(28例，8.9%)，31型(23例，7.3%)，33型(20例，6.3%)，52型(19例，6.0%)，68型(14例，4.4%)，56型(6例，2.0%)，59型(3例，1.0%)，45型(3例，0.9%)，39型(2例，0.6%)，51型(1例，0.3%)，未检出35型；中国人群常见亚型占阳性标本的7.3%，按所占比例多少分别列出如下，53型(10例，3.2%)，66型(9例，2.9%)，CP8304(4例，1.2%)，在本地区中多重感染率为 17.8%(92/514)。
2.3 感染的年龄分布
514例患者各年龄段分布及HPV感染率见表1。HPV感染率在25～29岁年龄段达高峰, 40～44岁就明显下降。感染人群高峰年龄出现早,但下降快。各年龄段HPV感染检出率差异有显著性意义(P<0.01)。
表1514例患者各年龄段分布及HPV感染率
2.4 不同宫颈疾病患者HPV感染情况
宫颈炎症患者感染HPV 类型以11、6、16为主。尖锐湿疣患者感染HPV 类型以11、16、6为主。宫颈上皮内瘤变(CIN)患者HPV 类型以16、18、11为主。CIN患者的HPV感染率、多重感染率明显高于其他宫颈疾病(P<0.01)。不同宫颈疾病患者HPV 感染及多重感染情况见表2。
表2 不同宫颈疾病患者HPV感染及多重感染情况
3 讨论
3.1 HPV的感染率情况
目前，HPV感染已经成为一种流行性传播疾病，至少有50%的妇女在其一生中会感染HPV [3]，HPV在不同地区的感染率不尽相同，在世界范围内，北美洲、欧洲、亚洲属于感染率较低的，分别为11.3%，8.1%，8.0%，而中美洲及非洲的感染率则相对较高，为20.4%和22.1%[2]。根据国内文献报道, 感染率较低的为深圳24.9%[4]，山西27.5%[5]，而北京57.1%[6]，广州59.7%[7]，温州60.1%[8]属于感染率高的地区。本研究数据表明，天津地区HPV感染率48 ......
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