关于革兰阴性杆菌中质粒ampC基因的检测与分析(2)
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研究表明，质粒介导的AmpC基因来源于几种肠杆菌科细菌的染色体ampC基因，例如蜂房哈夫尼亚菌、摩根摩根菌、弗劳地枸橼酸杆菌及阴沟肠杆菌等。在这些细菌的基因序列作为引物设计参考的基础上，本研究应用了6组具有属特异性的引物来检测质粒AmpCβ-内酰胺酶。产质粒AmpCβ-内酰胺酶的细菌对所有的β-内酰胺酶类的药物都普遍耐药，已经在临床上倍受重视，且大多数均与医院的感染有较大关系，因为难以区别同一菌株的多重β-内酰胺酶(多种ESBLs或 ESBL-AmpC联合耐药)，且质粒介导的耐药基因，无论是编码ESBL还是AmpC酶，都可通过各种途径转移至其他菌株的细胞内。而PCR是目前认为最有效的菌株的耐药机制及质粒AmpC的基因类型检测方法，能快速有效地检测质粒AmpCβ-内酰胺酶[5]。
用具有特异性的引物进行PCR，可覆盖了哈夫尼亚菌、假单胞菌、枸橼酸杆菌、沙雷菌、摩根菌及肠杆菌等菌属。PCR产物的电泳结果出现明显亮带的不一定都是质粒Amp C基因， 如阴沟肠杆菌在300bp的位置时会出现明显亮带，但其染色AmpC基因位置却在300bp，再如阴沟杆菌在405bp的位置时出现了明显亮带，经测序证明后，确定此质AmpC基因的类型是DHA。
综上所述，应用6组具有属特异性的引物同时对AmpC酶进行多重PCR检测，因此，要求先符合对引物满足相互兼容的实验条件的最佳前提。本研究中使用6组引物同时加入进行一次PCR的过程中，相比与单一引物的PCR的操作过程的复杂繁琐步骤明显减少，最大限度地缩短了检测的时间。试验证明，多重PCR技术特异性高，能简单、快速地检测革兰阴性杆菌质粒ampC基因。
参考文献
[1] 蒋燕群，曹娜，陈泰尧等，革兰阴性杆菌中质粒ampC基因的检测与分析[J]，上海医学检验杂志，2003，18(6)：328-329.
[2] 张丽梅，徐韫健，孙慧冰等，革兰阴性杆菌AmpC酶和AmpC耐药基因检测[J]，中国热带医学，2010，10(9)：1059-1061.
[3] 丁天然，张永信，β-内酰胺酶抑制剂的研究和开发[J]，上海医药，2011，(05).
[4] 林云，林平，肺炎克雷伯菌中质粒介导的AmpC酶的检测及基因型的研究[J]，中国卫生检验杂志，2010，(06).
[5] 袁海燕，肺炎克雷伯菌产ESBL和AmpC酶的检测及耐药性分析[J]，西部医学，2010，(03).
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