实验性自身免疫性重症肌无力大鼠干扰素-γ和白细胞介素-12水平变化的研究(2)
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1.7 统计分析 检测数据以“均数±标准差”(x±s)表示，两组之间的比较采用t检验。以α＝0.05为检验显著性水准。
表 1 第7周Lennon评分和T淋巴细胞IFN-γ、IL-12水平比较
(x±s，n=5)
注：与健康对照组比较▲ P﹤0.01
2 结果
2.1 二组大鼠EAMG症状评分 见表1。在AChR和CFA初次免疫后1周左右，EAMG组大鼠有3只出现短暂的肌无力症状，评分1～2分，持续2～5 d大多自行缓解。在初次免疫4周后，EAMG组大鼠全部相继出现MG样症状，7周达到高峰，评分1～3分。健康对照组大鼠始终均无任何肌无力样症状，EAMG症状评分0分。第7周EAMG组的Lennon评分显著高于健康对照组(P﹤0.01)。
2.2 二组大鼠T淋巴细胞IFN-γ水平比较 见表1。与健康对照组比较，EAMG组大鼠T淋巴细胞IFN-γ的表达水平显著增高(P﹤0.01)。
A：健康对照组，B：EAMG组
图 1 T细胞β-actin mRNA 的表达
A：健康对照组，B：EAMG组
图 2 T细胞IL-12p35 mRNA 的表达
2.3 二组大鼠T淋巴细胞IL-12p35 mRNA水平比较 见表1、图1、图2。2组大鼠T淋巴细胞β-actin mRNA 表达水平恒定,无显明显差异,表明该检测方法可靠。与健康对照组比较，EAMG组大鼠T淋巴细胞IL-12p35 mRNA的表达水平显著增高(P﹤0.01)。
3 讨论
机体免疫应答主要由B细胞和T细胞介导，T细胞应答则是机体对抗原产生免疫应答的关键环节。外周T细胞的激活和分化受遗传背景、TCR介导的信号强度、共刺激信号、细胞因子微环境及抗原提呈细胞的功能等影响。AChR特异性T细胞的活化及局部侵润、AChR抗体的产生及其对神经肌肉接头(NMJ)突触后膜AChR的攻击是MG器官特异性损伤的免疫学基础。因为T细胞的活化与分化受细胞因子微环境的影响，而AChR抗体的产生又通过细胞因子受T细胞调控[1]，故在MG异常自身免疫反应和MG耐受的发生过程中，细胞因子始终起着十分重要的作用。
IFN-γ主要由活化的Th1型T淋巴细胞产生，具有诱导MHC表达、激活巨噬细胞、决定T细胞归宿、促进B细胞增殖分化及上调其它细胞因子等多种免疫调节功能。IFN-γ在诱导B细胞成熟、辅助AChRab的产生并进而诱发MG临床症状和体征的过程中起重要作用，且可能是EAMG和MG的始发因子之一[2]。MG和EAMG体内IFN-γ诱导蛋白10及其受体表达增高，而阻断其信号转导可抑制EAMG发生[3]。用AChR加完全弗氏佐剂免疫Lewis大鼠诱导EAMG的同时，给予其重组大鼠IFN-γ皮下注射，结果诱导出的EAMG症状明显加重，AChRab和Th细胞水平也明显增高[4]。而用AChR免疫IFN-γ/IFN-γR缺陷的B6小鼠时，却不能诱导出肌无力的症状[5]。表达RelB质粒转染的未成熟DC可诱导EAMG耐受，同时抑制了IFN-γ的产生[6]。本研究发现，EAMG组大鼠T淋巴细胞IFN-γ的表达水平明显增高，提示IFN-γ在MG和EAMG的发病机制中具有重要作用。
IL-12是由分子量分别为35KD和40KD的两条链经2个二硫键共价结合而成的异二聚体糖蛋白，主要由活化的巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞产生，是最强的NK细胞激活因子，可促进CD4+ Th0细胞分化成Th1细胞，有致炎和免疫调节作用。给予外源性IL-12可显著提高EAMG易感鼠血清抗电镘AChR IgG2a抗体水平[7]；增加其病情严重度[8]。而当IL-12基因敲除鼠用电镘AChR免疫时，其血清电镘AChR特异性Th1细胞以及抗电镘AChR IgG2a抗体水平则明显降低，IL-12基因敲除鼠几乎没有显示出任何EAMG的神经生理证据，且AChR的减少也不明显[7]。给予抗IL-12抗体可增强口服耐受[9]。免疫抑制治疗可明显降低MG患者外周血单核细胞IL-12的分泌[10]。本研究发现，EAMG组大鼠T淋巴细胞IL-12的表达水平明显增高，提示IL-12在MG和EAMG的发生过程中亦起着十分重要的作用。
参考文献
[1] Huang WX, Huang P, Fredrikson S, et al. Decreased mRNA expression of TNF- alpha and IL-10 in non-stimulated peripheral blood mononuclear cells in myasthenia gravis[J]. Eur J Neurol, 2000, 7(2): 195-202.
[2] Zhang GX, Navikas V, Link H. Cytokines and the pathogenesis of myasthenia gravis[J]. Muscle Nerve, 1997, 20(5): 543-551.
[3] Feferman T, Aricha R, Mizrachi K, et al. Suppression of experimental autoimmune myasthenia gravis by inhibiting the signaling between IFN-gamma inducible protein 10 (IP-10) and its receptor CXCR3[J]. J Neuroimmunol, 2009, 209: 87.
[4] Wang HB, Shi FD, Li H, et al ......
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