HPLC法测定接骨七厘片中大黄素和大黄酚的含量
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【[摘要】目的 建立接骨七厘片中大黄素和大黄酚的含量测定方法方法 应用HPLC法，采用shimpack vp-ODS色谱柱(4.6mm×150mm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸(75：25)流速为1.0ml·min-1；检测波长：254nm结果 峰面积对进样量的回归方程为大黄素Y=1897533.2X-9677.4，r=0.9999(n=5),大黄酚Y=2538071.1X-21065.9，r=0.9999(n=5),大黄素在0.08~0.400μg、大黄酚在0.2016~1.008μg范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.73%( n=5),RSD=0.82%和 98.93%( n=5),RSD=0.79%。结论 该方法简便可行，准确可靠。
[关键词】接骨七厘片 大黄素 大黄酚 HPLC法 含量测定
中图分类号：R286文献标识码：B文章编号：1005-0515(2011)11-362-02
Determination of emodin and chrysophanol in Jiegu Qili tablets by HPLC
【ABSTRACT】Objective To established the determination method for emodin and chrysophanol in Jiegu Qili tablets.Methods HPLC was used with Shimpack vp-ODS column; mobile phrase: methanol-0.1%phosphoric acid (75:25); flow rate : 1.0 mL·min-1. detection wavelength at 254nm. Results The regression equation of peak area and concentration was emodin Y=1897533.2X-9677.4，with r=0.9999(n=5). chrysophanol was Y=2538071.1X-21065.9，r=0.9999(n=5), The emodin range was 0.08~0.400μg; The chrysophanol range was 0.2016~1.008μg. the average recovery was 99.73%%(n=5),RSD=0.82% and 98.93%( n=5),RSD=0.79% . Conclusion The method is sensitive and convenient.
【KEY WORDS】Jiegu Qili tablets ; emodin ; chrysophanol; HPLC; determination
接骨七厘片是由当归、乳香(炒)、没药(炒)、土鳖虫、大黄(酒炒)、龙血竭、骨碎补(烫)、自然铜(锻)、硼砂9味中药组成，具有活血化瘀，接骨止痛的功效，用于跌打损伤，续筋接骨，血瘀疼痛。其质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第三册，该标准只收载了鉴别和检查项目，未收载含量测定项目，为了控制其质量，通过研究，并参考有关文献，用HPLC法测定该制剂中大黄素和大黄素的含量，方法简便可行，准确可靠。
1 仪器与试药
1.1 仪器 日本岛津LC-10ATvp液相色谱仪，SPD-10Avp紫外可见检测器，CS-light色谱工作站。
1.2 试药大黄素和大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号分别为：110756-200110、110796-200311)，甲醇(色谱纯)，水为重蒸纯化水，其他试剂均为分析纯。
2方法和结果
2.1 色谱条件
shimpack vp-ODS色谱柱(4.6mm×250mm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸(75：25)；检测波长：254nm；流速：1.0mL·min-1。
2.2供试溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取大黄素和大黄酚对照品，加甲醇分别制成每1mL含大黄素8μg、大黄酚20.16μg的混合溶液。
2.2.2供试品溶液的制备 取本品20片除去包衣，精密称定，研细，混匀，精密称取粉末约1.8g ，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用 甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%的盐酸溶液10 ml，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10 ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容量，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10 ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 缺味阴性供试品溶液的制备取除大黄以外的处方中药材，按标准制法制备不含大黄的缺味阴性供试品，参照供试品溶液制备方法制备缺味阴性供试品溶液。
2.3 系统适用性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液、缺味阴性供试品溶液各10μL注入色谱仪，记录色谱图，结果供试品与对照品溶液在同一保留时间内出现吸收峰，大黄素和大黄酚峰的保留时间约为13min和17min，阴性对照溶液在此时无吸收峰(见图1)。即本试验条件下大黄素和大黄酚与其他组分分离完全，其他组分对测定无干扰。
大黄素和大黄酚对照品
大黄素和大黄酚样品
阴性对照品
图1.HPLC色谱图
2.4线性关系考察 分别精密量对取对照品溶液(含大黄素20μg /ml，大黄酚50.4μg /ml)1.0，2.0，3.0，4.0,5.0mL置于5.0mL容量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度。分别取20μL进样，测定峰面积，以峰面积(Y)为为纵坐标，进样量X(μg)为横坐标，绘制标标准曲线，计算得回归方程：
大黄素：Y=1897533.2X-9677.4
r=0.9999 (n=5)
大黄酚：Y=2538071.1X-21065.9
r=0.9999 (n=5)
结果表明大黄素在0.08~0.400μg、大黄酚在0 ......
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