孕妇白介素-18结合蛋白表达水平与HBV宫内感染相关性研究(1)
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【摘要】目的 分析孕妇白细胞介素-18结合蛋白(IL-18BP)表达水平与新生儿乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染的相关性，从细胞分子水平探讨HBV宫内感染发生机制。方法 选择90例HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性，肝功能正常，单胎足月妊娠孕妇所分娩的新生儿，检测新生儿脐血乙肝两对半及HBV DNA，根据新生儿是否宫内感染分为二组：研究组(宫内感染)30例，对照组(宫内未感染组)60例，用ELISA定量法测孕妇血清中白细胞介素-18结合蛋白水平，结果 1. 90例孕妇中，脐带血HBV-DNA阳性24例，HBsAg阳性9例，HBV-DNA和(或)HBsAg阳性者30例，宫内感染率为33.33%(30/90)2.2组孕妇外周血清HBV含量比较：HBV t= -8.973，P<0.01，感染组与未感染组HBV含量有显著性差异，且感染组比未感染组HBV的含量要高；3.2组孕妇外周血IL-18BP分泌水平比较：t= 5.345，P<0.01，感染组与未感染组IL-18含量有显著性差异，且感染组比未感染组IL-18的含量要低；3.2组孕妇外周血清HBV含量与IL-18BP分泌水平比较：r=-0.687，P<0.01，认为血清HBV含量与IL-l8结合蛋白分泌水平呈负相关；结论 HBV宫内感染组孕妇外周血清HBV含量较未感染组孕妇显著升高，而IL-l8结合蛋白分泌水平则显著降低，血清HBV含量与IL-l8结合蛋白分泌水平呈负相关。IL-18结合蛋白分泌水平参与了HBV宫内感染的调节机制。
【关键词】乙型肝炎病毒 疾病传播/垂直 IL-18 IL-18BP
中图分类号：R512.6文献标识码：B文章编号：1005-0515(2011)12-070-03
母婴垂直传播是儿童感染HBV的主要途径。据报道有50%左右的HBV携带者是母婴传播引起的。HBV属非致细胞病变性病毒，HBV感染时主要由免疫反应，尤其是细胞免疫反应介导肝脏细胞的损伤和病毒的清除。白介素-18结合蛋白(IL-18BP)是1999年确定的一种能够与IL-18 以高亲合力特异性结合,并拮抗IL-18相关生物学功能的蛋白因子。我们的前期研究显示HBV宫内感染与孕妇外周血IL-18分泌下降有关，IL-18水平下调可能是HBV宫内感染的危险因素之一。但IL-18BP是否参与IL-18的下调以及IL-18、IFN-Y、IL-18BP、IL-18BPmRNA这一机制在HBV宫内感染中的作用尚不明确。本课题通过研究HBV宫内感染组与未感染组之孕妇血清HBV含载量、IL-18结合蛋白分泌水平从细胞分子水平阐明HBV宫内感染可能机制，为免疫阻断胎儿HBV宫内感染探讨一条新途径。
1 资料与方法
1.1 研究对象 病例收集的纳入标准：取从2010年1月至2010年12月在江西省妇幼保健院完整产前检查并分娩的HBsAg、HBeAg及anti-HBc阳性但肝功能正常汉族孕产妇90例，孕妇单胎足月妊娠，孕期无先兆流产、先兆早产史，无TORCH感染史，无妊娠合并症及并发症，未使用其他研究药物、抗病毒药物、免疫抑制剂、细胞毒性或皮质激素类药物等，B超排除胎儿畸形，其丈夫排除HBV携带。分娩即刻采集新生儿脐带血，检测HBsAg和HBV-DNA，分HBV宫内感染者30例设为研究组，无HBV宫内感染者60例为对照组。孕妇年龄、孕产次、胎龄、新生儿性别及分娩方式两组比较均无统计学差异(P>0.05)
1.2.1 标本采集 选择患乙肝大三阳且肝功能正常，无其它妊娠并发症及合并症的单胎足月孕产妇，抽孕妇空腹血3管各3ml。抽其新生儿出生24小时内，未注射乙肝免疫球蛋白及乙肝疫苗外周血2ml，用于测乙肝两对半及HBV-DNA。常规分离孕妇及其新生儿外周血清及单个核细胞，置于-80℃冰箱中保存，备检。
1.2.2 乙肝两对半测定:采取ELISA法，试剂由中山生物工程有限公司提供，按说明书操作。
1.2.3 孕妇血清、新生儿脐血HBV-DNA检测:用荧光定量PCR法。试剂中山大学达安基因股份有限公司，操作步骤按说明书。
1.2.4 白介素-18结合蛋白测定：试剂由北京天更生物试剂提供，所用Labsystems MK3型酶标仪及可调多道移液器(5～200uL)为芬兰Thermo Labsystems公司产品，DNX-9620电脑洗板机由北京普朗新科技有限公司生产。操作步骤按说明书。
1.2.5 统计学处理
应用SPSS l1.0软件分析数据，结果以(x±s)表示，用t检验Pearson相关性分析，P<0.05为差异有显著性意义。
1.3 观察指标
1.HBV宫内感染标准：新生儿出生即刻脐带血清中检测到HBsAg和(或)HBV-DNA阳性(HBV DNA>1.00×103拷贝/ml为阳性)[20]。
2.IL-18结合蛋白水平：依据实验测得的标本的OD值和IL-18BP对应的回归曲线，求出IL-18BP的浓度水平。
2 结果
2.1 两组孕妇外周血清HBV-DNA及IL-18BP比较
本研究90例HBsAg及HBeAg双阳性孕产妇，分娩90例新生儿，检测新生儿脐带血HBsAg和/或HBV-DNA阳性30例，诊断宫内感染(研究组)，另60例阴性为宫内未感染(对照组)。
研究组孕妇外周血HBV-DNA含量明显高于于对照组，差异有显著性意义，P<0.01。IL-18BP含量明显低于对照组，差异有显著性意义，P<0.01。如表1。
表1 两组孕妇外周血清HBV-DNA含量及IL-18BP比较
2.2 孕妇外周血清HBV-DNA与IL-18BP相关性分析
两组孕妇外周血呈HBV-DNA与IL-18BP显著性负相关
表2 HBV-DNA与IL-18BP相关系数比较
3 讨论
3.1 HBV-DNA含量与HBV宫内感染
关于HBV宫内感染因素报道，一致认为HBV-DNA水平增高，新生儿宫内感染HBV风险增加。血清HBV-DNA是反映病毒在体内复制和宿主传染的直接指标。研究发现血清HBV-DNA高水平状态下，HBV抗原诱导大量免疫抑制因子产生，而产生IFN-γ反应缺乏或很弱，IFN-γ与HBV-DNA含量呈负相关，因此HBV-DNA通过抑制IFN-γ引起Th1/Th2细胞免疫失衡。本研究中，宫内感染组孕妇外周血清HBV-DNA含量较未感染组孕妇显著增高。魏俊妮[1]在乙肝母亲HBV含量及肝功能与其新生儿HBV宫内感染关系研究中指出，HBV含量与宫内感染有关，HBV-DNA>104copy/ml以上，宫内感染风险增加，进一步证实新生儿被感染的危险性随着HBV-DNA增高而增加。
3.2 白介素-18结合蛋白表达与HBV宫内感染 ......
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