P16蛋白在骨肉瘤中表达及临床意义
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【摘要】目的 探讨p16蛋白在骨肉瘤中的表达及临床意义。方法 应用SP免疫组化法检测P16蛋白在40例骨肉瘤及10例正常骨中的表达，分析P16蛋白表达和骨肉瘤病理分级、临床分期及不同临床病理因素间的关系。结果 p16在骨肉瘤中平均表达为60%，其表达与骨肉瘤的组织学分级、临床分期显著相关(P<0.05)。结论 P16蛋白在骨肉瘤的形成和发展中起不同程度的作用，其表达对骨肉瘤组织学分级、恶性进展和预后判断具有重要的价值。
【关键词】骨肉瘤 P16蛋白 免疫组化
中图分类号：R738.1 文献标识码：A 文章编号：1005-0515(2012)1-017-02
Expression of P16 protein in osteosarcoma and its clincal Significance
【Abstract】Objective To investigate the P16 protein expression in osteosarcoma and its clincal Significance. Methods Using immunohistochemistry test ( S-P methods) ， we examined the exp ressions of p16 p rotein in 40 cases with osteosarcoma ， 10 cases with normal bone as control group. It was compared in different histologic grade， clinical stage， Results The expression of p16 protein was 60% in osteosarcoma . The positive rate of P16 in osteosarcoma was significantly lower than that in normal bone tissue (P<0.05)， and relate to histologic grade and clinical stage.Conclusion P16 protein expression is closely related to tumorigenesis of osteosarcoma， suggesting that P16 protein may serve as a valuable marker for histologic grade，m alignant development and prognostic assessment of osteosarcoma.
【Key words】osteosarcoma P16 protein immunohistochemistry
新近发现的肿瘤抑制基因中p16能在人类多种肿瘤及细胞系中有失活和突变作用，引起相应蛋白的表达缺失，导致肿瘤细胞的异常增殖。p16蛋白的研究对于骨肿瘤的诊断、鉴别诊断和判断预后具有广阔的前景。我们采用免疫组织化学S-P法分别观察在40例骨肉瘤组织中p16蛋白提示的表达情况，分析了p16蛋白与骨肉瘤的组织学分级、临床分期及预后的关系。
1 材料和方法
1.1 材料
40例骨肉瘤选自1988～2009 年本院存档病例。骨肉瘤男性24例，女性18例，男女比1.5∶1，年龄11～57岁，平均年龄20岁，最高峰是11～21岁25例。骨肉瘤参照Price分级法； 参照Enneking标准划分临床分期，低生存组为<1年生存期的患者，共计9例(22.5%)，>3年者为高生存组，14例(35%)。随访全部病例。对照研究组选用10例正常骨组织。
1.2 方法
免疫组织化学法 将10%福尔马林固定、石蜡包埋的骨肉瘤组织制成4～5μm切片，常规脱蜡，浸入0.01mol/L、pH为6.0的枸橼酸盐缓冲液内，微波炉抗原修复10分钟，温度为92～98℃。用SP法进行免疫组织化学染色。P16试剂盒系北京中杉生物试剂公司提供的Zymed公司产品。
1.3 结果判定
P16蛋白免疫组织化学染色阳性反应为棕黄色和(或)棕褐色颗粒，P16蛋白定位于细胞核或(和)细胞浆上，自每张切片选10个高倍视野(×400)观察阳性细胞与细胞总数的比例关系，无表达为阴性(-)；表达≤50%为阳性(+)；>51%为强阳性(++)。
1.4 统计学处理 P16蛋白表达与骨肉瘤临床病理的关系，应用Pearsonx2 检验进行统计学分析，以中位数将P16染色结果分为高表达与低表达两组，统计两组骨肉瘤存活期，并行Long-rank 检验。
2 结果
2.1 P16 蛋白免疫组化染色结果
P16 阳性产物呈棕褐色细颗粒状，主要位于胞核，部分可见于胞浆内。阳性细胞呈弥漫或灶性分布。40 例骨肉瘤免疫组化染色结果阴性16 例(40. 00 %) ， 阳性24例(60. 00 %)，见表1。正常骨、骨肉瘤边缘反应性新生骨未见着色。统计学分析，Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅰb与Ⅱa间差异具有显著性(P<0.05)，Ⅰ级与Ⅲ级、Ⅰb与Ⅱb 、Ⅲa间差异具有显著性(P<0.01)。
表 1 P16 蛋白在骨肉瘤中的表达
2.2 P16 蛋白表达与骨肉瘤主要临床病理资料间的关系
P16 蛋白表达与骨肉瘤主要临床病理资料间的关系，见表2。P16 蛋白表达在未复发组较复发组高(P<0.01)，P16 蛋白表达在骨肉瘤肿瘤直径小于10cm较大于或等于10cm高(P<0.01)，且具有统计学差异。P16表达在性别、年龄、部位等方面都未显示统计学差异(P>0.05)。
表 2 P16 蛋白表达与骨肉瘤主要临床病理资料关系
2.3 P16 蛋白表达与骨肉瘤病人预后的关系
本组肿瘤P16 蛋白LI 中位数为50.4 % ，以此将骨肉瘤分为高表达组和低表达组，long-rank 检验。Long-rank 检验结果:X2=6.97 ，两者相差显著( P<0.05) ，表明P16 低表达组骨肉瘤患者的生存期较高表达组显著缩短。
3 讨论
P16是细胞周期中非常重要的调节因子，在多种肿瘤细胞周期增殖和细胞分化调控中起着十分重要的作用[1]。对细胞G1/S期转换有关键调控作用的基因p16蛋白，可抑制细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4和6[2]。P16蛋白的失活引起G1期缩短， 细胞周期加速， 特别是DNA在没有修复前过早地进入S 期，已经是细胞恶性转化的关键[3]。本研究结果显示：P16蛋白表达在骨肉瘤Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅰb与Ⅱa间差异具有显著性(P<0.05)，Ⅰ级与Ⅲ级、Ⅰb与Ⅱb期 、Ⅲa期间差异具有显著性(P<0.01)，说明P16蛋白表达随骨肉瘤组织学分级越高，表达越弱；同时临床分期越晚，其表达越弱。此外，P16蛋白在正常骨组织皆为阳性表达(为100%)。以上结果均提示P16基因的缺失或突变在骨肉瘤的形成或发展中起不同程度的作用 ......
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