HIV抗体初筛阳性血清免疫印迹试验结果分析
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【摘要】目的 对HIV抗体初筛阳性血清进行确认，了解河池地区H IV 感染者型别特征，为艾滋病防治工作提供准确科学的依据。 方法 用ELISA、胶体硒对河池市各地检测后上送的HIV抗体初筛阳性标本及本中心门诊、哨点监测等标本949份进行初筛、复核，阳性者用WB试验进行确认。结果 949份血清中，经ELISA、胶体硒初筛复核，268份为HIV 抗体阳性，其中260份确认为HIV-1抗体阳性；条带出现百分率：gpl60为100%、gp120和gp41为99.62% ，p66 、p51、 p31、 p24、 p55 、p17、p39分别为98.08%、93.83% 、95.00%、96.46% 、53.85%、69.23%、61.54%。结论 河池地区的感染者多为HIV-1 型感染者，初筛结果有假阳性须经确认试验才能得出准确结果。
【关键词】HIV抗体 免疫印迹试验
中图分类号：R446.6 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2011)3-316-02
艾滋病病毒(HIV)抗体免疫印迹试验(WB)是目前国内HIV抗体确认的首选方法，它能同时检测不同HIV抗原组分的抗体，其敏感性和特异性较高，可用于鉴别或肯定初筛试验结果。河池市疾病预防控制中心艾滋病检测确证实验室是2009年1月通过国家级评审验收。艾滋病检测确证工作的开展，大大方便了感染者和病人。为了解河池地区H IV 感染者型别特征现将2011年河池市艾滋病确认实验室对各地检测后上送的HIV抗体初筛试验阳性标本及本中心门诊、哨点监测等标本的初筛与WB确认试验结果分析如下：
1 材料与方法
1.1 标本来源 268份初筛HIV抗体阳性血清来源于2011年1月～10月的949份标本中筛出，主要为河池市所辖县(市)区疾病预防控制中心、血站、医院等部门送检的初筛试验检测为HIV抗体阳性的血清及本中心确认实验室初筛阳性的标本等。
1.2 检测方法 标本先采用酶联免疫吸附试验(ELISA)或 胶体硒快速检测。凡第一次初筛试验阳性的标本，再用同种试剂(双孔)和另一种试剂复检，阳性血清用WB试验进行确认。ELISA 试验使用生物梅里埃、北京金豪、北京吉比爱、珠海丽珠试剂; 快速试验使用雅培硒标 试剂。均在有效期内使用, 按试剂盒说明书操作。 EL1SA 法使用Wellwashplus型自动酶标洗板机和郑州2010酶标仪。确认试验 WB试剂来自新加坡Genelabs公司生产的Diagnostics HIV Blot，均在有效期内使用。试验按说明书操作，由2名实验室人员分别记录结果综合判定。
1.4 WB试验结果判断标准 按中国疾病预防控制中心《全国艾滋病检测技术规范》(2009版)[1]的标准判断，同时符合以下2条标准可判为HIV-1抗体阳性：①至少有2条env带(gp41和gp160/gp120)出现，或至少1条env带和p24带同时出现；②符合试剂盒提供的阳性判定标准。判定HIV-1抗体阴性：无HIV抗体特异带出现；HIV抗体不确定：出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。
2 结果
2.1 初筛试验结果 949份标本经用ELISA(661份)和胶体硒(288份)法筛查，268份(ELISA阳性83份，胶体硒阳性185份)为HIV抗体阳性。
2.2 WB确认试验结果 268份初筛阳性的标本经确认试验，结果260份被确认为HIV-1抗体阳性，占97.01%；5份被确认为HIV-1抗体不确定，占1.86% ；3份被确认为HIV-1抗体阴性，占1.12% 。其中，ELISA试剂盒检测阳性的83份中，假阳性1份，假阳性率为1.20%，胶体硒试剂盒检测阳性的185份中，假阳性2份，假阳性率为1.08%。
2.3 带型结果 确认的260份阳性标本中，呈现全带型152份，占58.46%； 8条带的52份，占20.00% ；7条带的39份，占15.00%， 6条带的12份，占4.62%；5条带的3份，占1.15%,4条带的2份，占0.77%。260份中，env(HIV被膜蛋白)带型中的gpl60均阳性，259份gpl20和gp41阳性；pol(HIV多种酶蛋白)带型中，p66 255份阳性、p51 244份阳性、p31 247份阳性；gag(HIV型相关核心蛋白)带型中，p55 140份阳性，p24 256份阳性，p17 180份阳性, p39 160份阳性，详细见表1。WB试验报告为HIV抗体不确定的5例为可疑结果，只呈现出gpl60、gpl20、gp41、p24带型，其中2例有gpl60带，1例有p24带，1例有gp41带，1例有gpl60gpl20带。产生不确定结果原因有待今后追综检测分析探讨。
表1 260份血清确认试验带型分布
3 讨论
本组268份血清初筛为HIV-1抗体阳性者，经WB确认后有260例(占97.01% )为HIV-1抗体阳性，符合率较高，但仍出现3例假阳性，原因可能是由于筛查诊断试剂的敏感性高而特异性不如确认试剂，故不可避免的会出现复检试验阳性经确认试验为HIV抗体阴性的结果，往往是由于一些非特异性抗原引起的免疫交叉反应引起的。HIV病毒的抗原与其他逆转录病毒(HTLV) 有交叉反应, HIV感染的淋巴细胞抗原与一些人血清中的HLA抗体有交叉反应等[2]，因此，初筛试验时应选用高敏感性、高特异性的试剂，尽可能避免假阳性的发生，初筛试验阳性血清必须通过确认试验才能下结论。
检测结果显示，有5份结果为HIV-1抗体不确定。这是WB的缺点之一，可在某些情况下产生大量的不确定结果，不仅初筛阳性的标本可以出现不确定的结果，初筛阴性的标本做WB检测时也有大约15%出现针对一个或几个抗原的不确定结果。不确定结果可能提示HIV早期感染或者是一种非特异反应，究竟是哪一种情况取决于危险因素、临床表现以及WB的带型。持续的不确定结果可能提示非特异反应，有时AIDS病人也可以表现为持续的不确定结果。而对于WB检测的不确定结果，不论是哪一种可能都应进行随访，随访时间为1-6个月不等。如果6个月以后，带型消失或没有进展，可以排出HIV感染的可能，报告HIV抗体阴性；如果在随访过程中出现了带型的进展，特别是出现了包膜抗原的条带，可以确定是HIV早期感染。病毒分离培养、核酸检测和抗原检测，也有助于对不确定结果的解释[3]。
确认试验表明, 目前河池地区的感染者仍多为HIV-1型感染者, 与国内HIV 流行情况一致。在260份确认为HIV-1抗体阳性的血清中，152(58.46%)份出现env、pol、gag全带型，表明这些感染者体内病毒繁殖活跃，具有较强的传染性。检测结果显示外膜糖蛋白gp160出现机率为100% 、gp120及 gp41出现机率为99.62%，说明这些抗原成份是确认HIV感染的必要条件，p66 、p51、 p31及 p24出现机率分别为98.08%、93.83% 、95.00%及96.46%，说明这些抗原成份是HIV感染中常见的成份。检测结果显示，区带p39出现机率达61.54% ......
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