测定冷沉淀凝血因子Ⅷ含量的影响因素
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【摘要】目的 冷沉淀是从无偿献血者的全血(每个单位400毫升)获得的血浆制备的。血液采集后第Ⅷ因子的活性迅速下降，因此一般要在6—8小时内分出血浆，并立刻在-50度的条件下速冻并保存，将冰冻血浆放在0-4度的水浴中摇动融化，融化后血浆的温度不得超过6度。第Ⅷ因子沉淀下来。离心所得白色沉淀物
【关键词】冷沉淀 冰冻 凝血因子Ⅷ 融化
中图分类号：R927.2 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2011)3-326-02
冷沉淀是临床上常用血液成分的一种，其主要成分是凝血因子(FⅧ)与少量其他球蛋白和纤维蛋白原(Fbg)。FⅧ是体内凝血系统的重要组成成分，临床上主要用于甲型血友病患者大出血及血管性血友病和其他出血性疾病的治疗。现将影响冷沉淀FⅧ含量测定因数浅析如下。
1 材料与方法
1.1 试剂APTT批号537490， FⅧ血浆批号5406525，氯化钙溶液批号539449，定标血浆批号503214C，正常人参比血浆批号20100805.仪器为CA-50血凝分析仪。
1.2 实验方法
凝固法原理：试剂与血浆混合后，Fbg转变成纤维蛋白而凝固，致使检测标本密度增加而被仪器检测出终点。
冷沉淀的制备：采集新鲜全血(6小时内的全血)。经3800转离心30分分离出血浆，将新鲜液体血浆放入-50度冰箱速冻，经24小时以上冰冻后才可用于冷沉淀的制备。将冰冻血浆放在0-4度的水浴中摇动融化，融化后血浆的温度不得超过6度，此时第Ⅷ因子与少量其他球蛋白和纤维蛋白原(Fbg)沉淀下来。离心所得白色沉淀物即为冷沉淀(它相当于血浆总量蛋白的3%，第Ⅷ因子活性占原始血浆的40%左右)。冷沉淀和血浆15-20毫升留在袋内，其余血浆移出。此冷沉淀就在-30度以下保存，有效期为6-12个月。再取24份新鲜的血浆分成3份，分别放于-50度、-30度、-20度冰箱中保存1周。取出制备冷沉淀，立刻进行冷沉淀FⅧ：C含量测定。
2 结果
不同温度条件下保存的新鲜冰冻血浆(FFP)的检测结果见表1
随机抽取-30度保存的冷沉淀(报废性抽检)，立即在37度水浴箱中轻轻摇动，使之快速融化。融化后即刻开始FⅧ：C含量测定与无菌试验，约3小时后再检测FⅧ：C含量并进行比较。融化后即刻FⅧ：C含量为(129.9±33.7)IU/袋，融化后3小时为(98.1±31.7)IU/袋(P<0.05)。
表1 不同温度保存的FFP冷沉淀制备的检测结果
与-30度比较，1)P<0.05，2)(P>0.05)
无菌试验之后迅速把标本放入低温冰箱中冻存，再用37度水浴融化1次。结果FⅧ:C 1次融化为(124.0±29.1)IU/袋，2次融化为(87.0±30.9)IU/袋(P<0.05)。
用血凝仪检测FⅧ含量的操作中加入APTT3min再加入CaCI2，FⅧ: C为(117.0±29.6)IU/袋，与加APTT5min后加CaCI2的FⅧ: C为(99.0±32.3)IU/袋相比，差异无统计学意义(P>0.05)。
3 讨论
FⅧ和FV是凝血中被消耗的最不稳定的因子。FⅧ: C在体外的半衰期为8—12小时，这是FⅧ: C活性丧失的主要原因，也是血液与带负电荷的异物表面接触而启动内性凝血途径使FⅧ: C失活的另一原因。所以在成分分离及冷沉淀的制备过程中，应保证在6小时内把新鲜血浆放入-50度冰箱中保存，并且在24小时后制备冷沉淀应在0—4度条件下进行。本结果显示，将-50度、-30度速冻的FFP制备冷沉淀，FⅧ: C较好，将-20度保存的FFP制备冷沉淀，FⅧ: C含量明显下降。所以，按制备的操作规程，FFP在-50度条件下制备冷沉淀较好。制备冷沉淀后立即置于-30度中冻存。
每月质控科对冷沉淀进行抽检时，通常情况下，在37度水浴中融化后先做无菌试验，然后在进行FⅧ: C测定和其它项目的检测。笔者通过实验体会：融化后混匀，立即用无菌注射器抽出样本，马上置于冰水浴中检测FⅧ: C含量，然后再作无菌试验，测得的FⅧ: C较为准确；若将标本反复冻融，FⅧ: C含量将明显下降。所以，FⅧ冷沉淀在37度水浴中融化后应尽快输注，以减少室温存放的时间，保证冷沉淀中FⅧ: C的含量，从而提中高临床疗效。
用血凝仪检测FⅧ: C含量比手工操作更准确，重复性更好，每次实验都有定标血浆和正常人血浆作对照。尽管凝血仪器的精密度较高，但由于检验人员的技术水平以及加入APTT后掌握的时间等因素。仍会影响FⅧ: C含量。所以，检测FⅧ: C时要尽量缩短在室温停留的时间，在冰水中尽快稀释 ......
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