梅毒螺旋体抗体检测方法的临床研究
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参见附件(2531KB,2页)。
[摘要] 目的 对化学发光法检测梅毒螺旋体的敏感性及特异性进行临床研究并探讨其低S/CO值状况下患者的感染情况。方法 别采用免疫印迹法、化学发光法、酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、明胶颗粒凝集法(TPPA)检测梅毒螺旋体抗体;采用甲苯胺红不加热实验(TRUST)检测抗心磷脂抗体。结果 1以免疫印迹法为确证实验分别与其它几种实验进行比较,结果表明TPPA及TP(ELISA)两种实验的结果差异有统计学意义(P<0.01);TRUST由于是非特异性检测方法未与免疫印迹法进行对比分析,其检测阳性率为51.89%;与化学发光组进行比较差异无统计学意义(P>0.05)。2化学发光法检测梅毒螺旋体抗体S/CO值为1.0~3.0者其TRUST效价为1:64组阳性检出率为38.71%,TRUST效价为1:128组阳性检出率为25.81%;S/CO值为0.5~1.0者其TRUST效价为1:64组未见阳性标本检出,TRUST效价为1:128组阳性检出率为4 %。结论 1 化学发光法检测梅毒螺旋体抗体不但有很好的敏感性而且有很高的特异性,并且适合临床大量标本的检测。2 化学发光法检测梅毒螺旋体抗体在S/CO值处于0.5~3.0的低值灰区时应建议随访并对其进行多滴度的TRUST检测。
[关键词] 化学发光; 梅毒螺旋体抗体
[中图分类号] R377+.1[文献标识码] A[文章编号] 1005-0515(2011)-04-298-02
近年来,梅毒发病率有不断上升趋势,并且已从高危人群向普通人群扩散[1]。梅毒的血清学检查也被卫生部列为输血前、术前等必查常规项目,梅毒是由梅毒螺旋体(treponema pallidum,TP)感染引起的性传播疾病,具有高度传染性。梅毒的诊断依靠流行病学史、临床症状和体征及实验室诊断三方面信息,其中实验室诊断具有重要意义,它不仅是诊断梅毒必不可少的方法,也是判断疗效和复发的重要依据。梅毒的实验室诊断分为梅毒病原体检测和梅毒血清学检测,而不同试剂方法结果各异。因此,选择敏感性高、特异性强的实验室检测方法有助于梅毒的诊治。本研究采用化学发光法对我院2009年7月到2010年6月间7102例门诊及住院患者进行梅毒的血清学检测,对检出的96例阳性及随机抽取的100例阴性血清分别进行明胶凝集法(TPPA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫印迹法(Western BlotWB)的检测,结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源: 我院2009年7月到2010年6月间7102例门诊及住院患者,对检出的96例阳性及其中随机抽取的100例阴性患者进行研究,青年对照组(20岁~45岁)及老年对照组(46岁~85岁)各50例分别来自健康体检者,男女比例与研究组一致。
1.2 主要试剂:由北京科美东雅生物技术有限公司提供梅毒螺旋体抗体诊断试剂(化学发光法);上海科华生物工程股份有限公司梅毒螺旋体抗体诊断试剂(酶联免疫法);由德国欧蒙医学实验诊断股份公司提供抗梅毒螺旋体抗体IgG检测试剂(免疫印迹法);由珠海丽珠试剂有限公司提供梅毒螺旋体抗体诊断试剂(凝集法);上海荣盛生物技术有限公司提供的甲苯胺红不加热实验。
1.3 实验方法:1)免疫印迹法检测梅毒螺旋体特异性抗体操作方法:取出所需的膜条进行封闭,在温育槽中分别加入1.5ml已稀释样本室温(18-25℃)温育30分钟清洗后加入1.5ml已稀释的酶结合物温育30分钟,加底物温育10分钟判读结果。2)梅毒螺旋体抗体(化学发光法)操作程序:加样,阴性及阳性对照孔每孔加入50μl对照品,样本孔每孔加入50μl血清,每孔再加酶标记物50μl温育60分钟,洗板后加加底物液避光静置反应5分钟测量各孔的发光值(RLU)。3)梅毒螺旋体抗体诊断试剂(酶联免疫法)操作方法:每孔加样品及酶各50μl,37℃温育60分钟,重复洗6次后拍干,之后每孔加入底物缓冲液50μl,再加入底物液50μl,置37℃温育15分钟,每孔加入终止液50μl,读取各孔A值。4)梅毒螺旋体抗体诊断试剂(凝集法)操作程序:用微量反应板以2n的方式从第1孔稀释至第4孔,用滴管在第3孔中滴入1滴(25μl)未致敏粒子在第4孔滴入1滴(25μl)致敏粒子,震荡后加盖室温下水平静置2小时后,判定结果。5)甲苯胺红不加热实验操作方法:分别吸取50微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中,取待测血清或血浆50微升置于纸卡的另一圆圈中,用滴管垂直分别滴加TRUST试剂1滴于上述血清中按100转/分摇动8分钟,肉眼观察结果。
1.4 统计学方法:应用SPSS 12.0统计软件,显著性比较采用X2检验。
2 结果
本研究依化学发光法梅毒螺旋体抗体结果(参考范围为:S/CO<1)将实验组分为化学发光法检测阳性组及化学发光法检测阴性组,将对照组分为:青年对照组(20岁~45岁)及老年对照组(46岁~85岁)分别进行TPPA、TP(ELISA)、 TRUST及WB的检测,结果见附表。以免疫印迹法为确证实验分别与其它几种实验进行比较,结果表明TPPA及TP(ELISA)两种实验的结果差异有统计学意义(P<0.01);TRUST由于是非特异性检测方法未与免疫印迹法进行对比分析,其检测阳性率为57.2%;与化学发光组进行比较差异无统计学意义(P>0.05)。
3 讨论
本文中TPPA法未检出阳性的24份血清标本,经临床证实11例为临床治疗后复查的梅毒患者,据分析出现这种情况可能是因为经过治疗后患者的梅毒非特异性抗体和特异性抗体明显下降或消失所致[2],其余13例由于未配合随访,因此未做分析。TP—ELISA因其方法学上存在敏感性较发光法低的因素,也即lumino标记要优于HRP标记的敏感性,因此可见化学发光法具有一定优势,必要时可作为TPPA法的补充实验[3]。虽然TPPA操作简单,但试剂价格昂贵,且耗时长,结果判定难以自动化,须依靠肉眼判断且不易保存,对操作者的水平要求较高,限制了其用于大规模标本的筛查[4]。化学发光法作为国内新开发的梅毒确证试剂在这些方面也给检测者提供了便利。
本实验还检测了各组的TRUST情况,阳性组TRUST阳性率仅为57.2%;阴性组存在一定数量的假阳性。其与其它特异性实验符合率较差的原因是由于该实验检测的是心磷脂抗体,梅毒螺旋体感染后该抗体的出现晚于特异性抗体,潜伏期和初期梅毒患者血清可呈假阴性[5]。据报道,TRUST在I期梅毒、Ⅱ期梅毒的检出率高达96%~100%[6],TRUST在I期梅毒早期和晚期梅毒、晚期潜伏梅毒及治疗后梅毒可呈阴性,在一期潜伏期及晚期梅毒中检出率为58%~85%[7]。一般情况下TRUST可以作为治疗状况的监测,但有少数患者血清反应在规定随访时间内不阴转,这种现象称之为血清固定或血清抵抗,这主要是由于细胞免疫不平衡和抑制所造成的[8]。
总之,梅毒血清学检查是诊断梅毒的重要依据,但不是唯一依据。对于临床疑为梅毒感染者,对梅毒的诊断应按照梅毒诊断标准及处理原则GB15974-1995规定:梅毒诊断必须根据病史、临床症状、体检及实验室检查等进行综合分析 ......
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