两种糖化血红蛋白A1c测定方法的对比实验(2)
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2 结果
2.1 病人样本测定结果(Xij,Yij)及均值(Xi,Yi)、偏移(Xi-Yi)数据表明，同一份病人样本的测定结果，方法间以及方法内的差异均不大，说明两种方法内的重复性以及方法间的可比性较好(表1)。
表1数据记录表
2.2 分别用两种方法测定结果均值间的回归方程Y=1.01161X-0.1164,决定系数为0.9874，根据EP9-A2文件，两种方法间的决定系数大于0.95即可以接受。如果r2<0.95，则需要增加样本量，以扩大样本中糖化血红蛋白分布范围。Yi对Xi散点图见图1。
图1Yi对Xi散点图
2.3 (Yi-Xi)对 的偏移：同一份样本分别用两种方法重复测定的均值之间的偏差在-0.35%到0.40%之间(图2)，该数据不能直接反应两种方法之间的偏差，必须进行进一步的数据处理。
图2(Yi-Xi)对Xi的偏移图
2.4 每个标本，每次用两种方法测定结果间的偏差(Yjj-Xij)为-0.4%到0.4%之间，以(Yjj-Xij)对Xi的偏移图见图3。
图3(Yjj-Xij)对Xi的偏移图
2.5 离群点判断:第32号标本，由于使用G7两次测定结果间的差值为0.4%，超过了4倍平均差值(0.37%)，故该点被视为离群点，不能用来计算结果。EP9-A2规定，所有数据里面，如有2.5%的离群点，可以剔除该离群点后进行后面的计算。如果离群点超过2.5%，则应该删除离群点当天所有数据，增加实验天数以获得足够的数据。
2.6 相关、回归计算及偏移评估：利用去除离群点的数据，计算两个方法间的线性回归方程为y=1.032x-0.212,r=0.9916(r2=0.9833)。根据该直线回归方程，对两种方法测定病人标本糖化血红蛋白结果进行预期偏倚估计。在糖化血红蛋白值为6.63%时，两个方法之间的偏倚为零；在病人样本糖化血红蛋白低于此值时，TOSOH G7测定值低于PRIMUS CLC385的测定值；糖化血红蛋白高于6.63%，TOSOH G7测定值高于PRIMUS CLC385；在4.8%-16.0%范围内，两种方法测定糖化血红蛋白相对偏倚在-1.25%至1.86%间，两台仪器测定的结果间表现出了有很好的可比性(表2)。
表2预期偏移估计
3 讨论 糖化血红蛋白作为糖尿病患者筛、选进行血糖控制和疗效考核的有效检测指标，在临床中得到了广泛的使用，2002年美国糖尿病协会(ADA)已将其作为监测糖尿病控制的金标准，对其应用也作了明确的规定:即所有糖尿病患者均应常规测定糖化血红蛋白A1c(HbA1c)。
目前实验室常用的HbA1c的测定方法则包括离子交换色谱、亲和色谱法和免疫分析。其中离子交换色谱会受到如下干扰：胎儿血红蛋白(HB-F)与HbA1c的带电性很相近，在离子交换HPLC分析图上可能呈现一个独立的Hb-F峰，也可能与HbA1c峰重叠(这要视离子交换柱的分能力而定)。亲和色谱法的特点是，只要血红蛋白分子上有糖基化结构，不论它结合在哪个氨基酸上，都能被硼酸盐亲和柱捕捉到除葡萄糖外，血液中所有的糖类都可与Hb相结合，因此该方法的检测的为糖化血红蛋白总量，报告中的HbA1c含量是通过校准曲线计算出来的。免疫方法受到的干扰，一是使用针对β链N末端6个氨基酸结构有特异性的单克隆抗体，但对Hb-F的r链N末端没有特异性，因为在6个氨基酸中有3个不一样，使抗体捕捉不到糖化的Hb-F，使测量值偏低，测量结果依Hb-F的量的多少等比例减少。
美国临床化学协会(AACC)在1993年成立分委会进行GHB的标准化工作。标准化工作由美国国家糖化血红蛋白标准化计划(NGSP)指导委员会于1996年完成。这一工作使得美国临床实验室间GHB测定的结果有了很大的改善(2000年):90%的实验室以HbA1c报告GHB的结果；所有参加NGSP活动实验室测定结果的室间变异系数(CV)小于5%；HbA1c检测结果与靶值的偏差小于0.8%。目前美国绝大多数实验室报告的结果都能溯源到DCCT结果，使对糖尿病及其并发症的治疗和预防工作有了统一的参考标准。
1995年国际临床化学组织(IFCC)建立了工作组，以研发HbA1c测定的标准物质和标准方法为目的，在其建立的实验室网络中，使用纯化的HbA1c和HbAO进行校准，并致力于建立与NGSP网络结果间的联系。实验结果显示，IFCC的HbA1c结果略低于NGSP的结果[2,3]。
在我国，卫生部临床检验中心2004年使用PRIMUS公司的CLC 385型糖化血红蛋白测定仪通过了NGSP的LEVEL I认证，国内目前也有其他医院和中心实验室通过了NGSP的LEVEL I认证。但是国内的现状是不同实验室间糖化血红蛋白测定结果之间存在较大的差异，2010年全国糖化血红蛋白室间质量评价计划的结果显示，方法内的变异在3.68%到19%之间，其中高效液相色谱法(包括离子交换色谱和亲和色谱)的方法内的变异最小，为3.68%，而所有实验室测定结果间的变异系数在14.6%-16.1%之间。我国糖化血红蛋白测定标准化的标准化工迫在眉睫，标准化工作的核心问题就是建立参考系统，卫生部临床检验中心已经这方面做了的一些工作，在承担的863课题中，我中心建立了液相色谱串联质谱测定HbA1c的候选参考方法，研制了国内首批人血红蛋白溶液中HbA1c标准物质，以常规方法研究了稳定性、均一性，均达到国外同类产品质量水平，申请国家一级标准物质已通过终审。另外，我中心近几年开始发放冰冻人血HbA1c室间质评样本，排除了基质效应的影响，为更有效地评价室间质评结果提供了充分条件。目前，中心正致力于参考实验时网络的建立，有望在近几年内，在全国各实验的配合下，不断提高实验室HbA1c检测结果的可靠性 ......
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