一起福氏志贺氏菌4C型引起暴发流行的病原学检测
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[摘要] 目的 通过收集患者大便标本经实验室病原学诊断，采用科学的检验技术，查明引起该次菌痢的主要病原菌。方法 将收集的大便标本进行增菌培养、分离培养、分纯培养、血清学鉴定、系统生化鉴定、药敏实验。结果 检出福氏志贺氏菌4C型。结论 根据实验室病原学鉴定结果显示，该次细菌性痢疾暴发流行是由褔氏志贺氏菌4C型所致。
[关键词] 痢疾； 暴发流行； 病原学； 血清学
[中图分类号] R516.4 [文献标识码] A [文章编号] 1005-0515(2011)-12-366-01
2007年6月1日至4日，四川省甘孜州泸定县中学初中部发生一起细菌性痢疾暴发流行。首例患者于2007月1日下午2时岀现胃肠道不适腹泻等症状，随后又有数人出现不同程度的胃肠道症状，截止6月4日21时共计发病28人，其中男生11人，女生17人，无死亡。大便为粘液便、脓血便、水样便、稀大便、稀便，部分大便镜检脓细胞+++、白细胞+、吞噬细胞少许。经实验室血常规检查，白细胞总数升高。该院初诊为“急性细菌性痢疾”。据椐发病时间和发病病例视为突发公共卫生事件，即报卫生主管部门和疾病预防控制中心。由泸定县疾病预防控制中心检验科收集患者大便标本共10份进行病原菌分离鉴定，并作药敏实验。实验室结果如下：
1 材料和方法
1.1 实验材枓 生物安全柜，高压灭菌器，培养箱，各种实验用品。
1.2 培养基 SS琼脂,HE琼脂,MC琼脂,GN增菌液,四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)，克氏双糖铁琼脂。
1.3 生化反应 试剂与诊断血清生化反应实验管自备，志贺氏菌属诊断血清(50种)购自卫生部成都生物制品研究所。
1.4 抗菌药物敏感实验API20E
1.5 标本收集及分离培养 1)分别取未经用药入院患者大便(粘液便2份、脓血便1份、水样便2份、稀便5份)于无菌试管中并编号登记一同送实验室供致病菌的分离培养鉴定(共收集标本10份，编号为1至10号)。2)直接分离培养：直接取大便二接种环于SS琼脂平板、HE琼脂平板、麦康凯琼脂平板中分区划线后放37°C培养箱中培养24h观察菌落形态特征。菌落形态特征：1、3、5、6、8号标本在SS琼脂平板上形成较小无色、半透明、光滑、湿润、凸起、边缘整齐、革兰氏染色为较短的革兰氏染色为阴性杆菌，在HE琼脂平板形成中等大小菌落，光滑、湿润、呈绿色、菌落中心带黑色、凸起边缘整齐、革兰氏染色为革兰氏阴性短小杆菌。麦康凯琼脂平板上形成中等大小菌落、无色、半透明、中心带黑色、光滑湿润、边缘整齐、革兰氏染色为革兰氏阴性杆菌；2、4、7、9、10号标本在SS琼脂平板、HE琼脂平板、麦康凯琼脂平板上均形成较大的菌落，形态各异，边缘整齐，粉红色革兰氏阴性杆菌，根据菌落特征排除肠道致病菌。3)增菌培养：取大便适量加入GN增菌液及四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)中放37°C培养箱中增菌培养6-24h后(GN增菌液6小时，TTB增菌液24小时)。分别取1-10号标本的增菌液二接种环于SS琼脂平板、HE琼脂平板、麦康凯琼脂平板，分区划线后放37°C培养箱中培养24h观察菌落形态特征。菌落形态特征：1-10号标本经增菌后分离培养，在SS琼脂平板、HE琼脂平板、麦康凯琼脂平板上的菌落形态特征与直接分离培养1、3、5、6、7、8、9、10号均一致，将1、3、5、6、8号标本的可疑菌落进行分纯。4)分纯培养:将1、3、5、6、8号样品的可疑菌落分别转种于双糖铁高层斜面培养基中分纯放37°C24h供血清学试验、系统生化试验、药物敏感试验和初步生化鉴定，初步生化结果见表1。
2 结果 经样品增菌培养、分离培养、分纯培养、血清学试验、系统生化试验,1、3、5、6、8号样品检出褔氏4C型痢疾志贺氏菌，2、4、7、9、10样品未检出致病菌。
3 结论 通过实验室系统的病原学鉴定结果显示，该次引起急性细菌性痢疾暴发流行是由福氏志贺氏菌4C型。
4 讨论 1)该次细菌性痢疾暴发流行,共计28人患病均入院治疗，其中男生11人，女生17人,年龄在10-17岁,潜伏期10-48小时。2)志贺氏菌的致病力主要是浸袭力和毒素(毒素分内毒素和肠毒素)，志贺氏菌通过人体的天然屏碍进入体内，在体内肠粘膜上皮细胞生长繁殖大量释放出内毒素，使肠粘膜上皮细胞死亡，粘膜发炎形成溃疡岀现脓血大便。A群个别血清型可产生肠毒素，毒力较强岀现水样大便。3)志贺氏菌只引起肠道传染病，很少进入血液和远组织，所以一般不引起其它疾病。该菌只能对人敏感。4)福氏志贺氏菌4C型，是我州首次分离出新的血清型，根据有关资料报道，其它地区也有该菌株引起菌痢流行的相关报道 ......
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