雷米普利对2型糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响(2)
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参见附件(2783KB，2页)。
2.2.3 肾组织免疫学检查 常规脱蜡，封闭，一抗37℃孵育2小时，4℃冰箱过夜，标记二抗，作免疫染色，应用高清晰度彩色免疫图像分析系统(IPP55.0)分析，测定肾小球平均光密度直径。
2.2.4 肾脏组织电镜观察 肾组织固定，脱水，包埋，切片，染色，在Hitachi-7500透射电镜下观察。
2.3 统计学方法 实验数据以x±S表示，应用SPSS14统计软件进行处理，两组间数据采用ANOVA检验，若方差不齐，采用非参数统计检验，P<0.05有统计学意义。
3 结果
3.1 各组大鼠血糖、肾功能及病理形态的变化 见表1。
表l 各组大鼠尿白蛋白，血糖、BUN、Cr的变化(x±S)
注：R组与N组比较(除肾重外)：▲P<0.05； R组与D组比较(除肾重外)：#P<0.05；D组与N组比较(除肾重外)：★P<0.05。
与N组相比，D组大鼠经高糖、高脂饮食喂养成模后，血糖明显升高，达到糖尿病模型标准,造模8周后，D组尿ALB、BUN、Cr值，肾重/体重与C组比较明显升高；经瑞泰治疗后，R组体重有明显增长，肾脏重量虽无明显变化(P>0.05)，但其肾重及肾重/体重均明显低于D组(P<0.05)。
3.2 正常对照组、糖尿病组、糖尿病瑞泰治疗组病理改变 见图1。
正常组(N) 糖尿病组(D) 治疗组(R)
图1 正常对照组(N组)、糖尿病组(D组)、糖尿病瑞泰治疗组(R组) HE(×200)
光镜下观察发现，D组大鼠系膜区增宽，GBM明显增厚，部分肾小球硬化，经瑞泰治疗后，R组上述病理改变得到明显改善。
3.3 正常对照组、糖尿病组、糖尿病瑞泰治疗组超微结构改变 见图2。
正常组(N) 糖尿病组(D) 治疗组(R)
图2 正常组肾脏(N组)(×7000)、糖尿病组(D组)(×10000)、糖尿病瑞泰组(R组)(×8000)超微结构
电镜下可见，N组血管内皮细胞足细胞未见异常，肾小球基底膜结构清晰完整。D组基底膜不均匀增厚，内皮细胞排列紊乱，完整性破坏，足突融合、增粗。肾小管上皮肿胀。溶酶体内部分可见空泡变性，线粒体肿胀。R组亦可见上述变性，但程度较D组明显减轻。
3.4 各组大鼠肾组织中MDA含量、SOD活性及硝基酪氨酸(NT)的变化 见表2、图3。
表2 各组大鼠肾组织中MDA含量、SOD活性及NT变化(x±S)
注：R组与N组比较：▲P<0.05；N组与D组比较：#P<0.05 ；N组于D组比较：★P<0.05。
正常组(N) 糖尿病组(D) 治疗组(R)
图3 正常对照组(N组)、糖尿病组(D组)和糖尿病瑞泰
治疗组(R组)硝基酪氨酸的表达SP法(×400倍)
造模8周后，SOD活性较同期N组下降，而D组肾组织中MDA含量则较同期C组明显升高。经瑞泰治疗后，R组S0D活性则较同期D组增加，MDA含量较同期D组明显下降，造模8周后，D组肾组织中硝基酪氨酸(NT)活性较同期N组明显升高。经瑞泰治疗后，R组肾组织中硝基酪氨酸(NT)活性较同期D组明显下降。
3.5 各氧化应激指标与尿白蛋白和Cr的相关分析 见表3。
表3 MDA、SOD、NT与24h尿微量白蛋白、血Cr相关分析
表3表明SOD与24h尿微量白蛋白、血Cr呈明显的负相关，而MDA、NT与24h尿微量白蛋白、血Cr呈明显的正相关。
4 讨论 糖尿病科引起视网膜、肾脏、神经等多种器官并发症，其中糖尿病肾病是最为严重的并发症之一，也是导致临床上糖尿病患者死亡的主要原因。近年来，大量的研究表明，氧化应激在糖尿病血管病变的发生过程中扮演着重要的角色。由于微血管的损害是糖尿病肾病产生的主要机制，糖尿病肾病的发生发展是否与氧化应激有关，目前机制不完全清楚。氧化应激是指体内活性氧类生成和抗氧化防御功能之间平衡的紊乱。正常情况下，自由基反应对于机体防御机制是必要的，自由基的产生和清除保持平衡。但在某些病理情况下，体内自由基大大增加，同时，机体抗氧化能力下降，从而直接引起生物膜脂质过氧化、细胞内蛋白及酶变性、DNA损害，最后导致细胞死亡或凋亡，组织损伤，疾病发生。
在本实验中，成功建立了2型糖尿病的大鼠模型。研究发现，12周后，糖尿病大鼠各种氧化应激指标包括MDA和NT都明显增高，而抗氧化指标SOD则明显低于正常对照，说明2型糖尿病大鼠的氧自由基生成增多，抗氧化能力明显下降，促进了糖尿病的发生，这与近年的一些研究一致。
本研究还表明糖尿病的氧化应激与糖尿病肾病的发生存在密切关系，2型糖尿病大鼠，BUN，Cr和ALB升高，DBM增厚，系膜区明显增宽，部分肾小球出现硬化，足突成阶段性融合，说明高糖状态下肾脏功能和形态均受到损伤。相关分析表明糖尿病大鼠尿白蛋白，Cr与NT和 MDA呈正相关，与SOD呈负相关,说明氧化应激参与了糖尿病肾病的发生发展。
NT是自由基引起蛋白质损伤的一个重要标志物，目前认为硝基酪氨酸是ONOO-在体内生成的特异性标志物，能敏感反映ONOO-含量。近年研究发现糖尿病肾病时NT表达明显增高，是肾小球细胞蛋白质氧化应激的指标。本研究发现成模后的2型糖尿病大鼠肾脏的NT表达明显高于正常组(P<0.05)并与24小时尿白蛋白排量密切相关，说明氧化应激在糖尿病肾病的发病机制中起重要作用。因此，抗氧化治疗可减轻DM引起的肾脏损伤。
本研究通过雷米普利抗氧化治疗，造模12周后，发现雷米普利治疗组氧化指标MDA的水平明显减少，SOD的含量增加，同时使尿白蛋白水平下降，肾脏病理和超微结构都有明显的好转，表明其改善了氧化应激状态，缓解了肾损伤，保护了肾脏功能。血管紧张素转换酶抑制剂(an-giotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)作为临床上的常用药物，可以抑制缓激肽的降解，可产生血管舒张、抗动脉粥样硬化、抗炎和抗氧化作用。雷米普利作为ACEI典型代表药物，在临床上广泛应用，有较强的降压、治疗心力衰竭及抗氧化应激的作用 ......
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