HPLC法测定冰黄液中盐酸小檗碱含量
【摘要】目的采用HPLC法测定冰黄液中盐酸小檗碱含量。方法HPODS—C18柱(250mm×4.6mm，51μm)，流动相为乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液(35：65)，检测波长424nm，柱温室温，流速1ml/min。结果盐酸小檗碱的线性范围为175～875ng，回归方程为A=7.081×102C-7.7×102，r=0.9992，平均回收率为98.4%，RSD=2.9%。结论本方法操作简单、重现性好、精密度好，可以用来控制本制剂的质量。
【关键词】HPLC；冰黄液；盐酸小檗碱；含量测定
【中图分类号】R931 【文献标识码】C【文章编号】1005-0515(2010)004-008-02
冰黄液是由黄连、大黄、人工牛黄、郁金、石菖蒲、冰片等中药组成，具有清热解毒、醒神开窍、化痰凉血、通腑排毒之功效，通过直肠滴注给药，用于治疗中风急性脑出血。方中黄连为君药，盐酸小檗碱是其主要有效成分，因此选择盐酸小檗碱作为定量分析指标成分，并采用HPLC法建立盐酸小檗碱的含量测定方法，为制定冰黄液质量标准提供参考。
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1 实验材料
1.1 仪器
岛津LC-10A液相色谱仪；SB2200超声清洗机(上海必能信超声有限公司)。
1.2 试药
冰黄液(批号20050329、20050408、20050509、20050516、20050523，均由本院制剂室提供)；盐酸小檗碱对照品(批号110713-200208，中国药品生物制品检定所)；甲醇、乙腈为色谱纯；水采用二次重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱：HPODS-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液(35：65)；检测波长：424nm；柱温：室温；流速：1ml/min；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。
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2.2 供试品溶液的制备精密量取本品1ml，置具塞三角烧瓶中，精密加入盐酸一甲醇(1：100)混合溶液100ml，称定重量，超声处理20min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品3.5mg，置100mI量瓶中，加盐酸一甲醇(1：100)混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.4 干扰因素考察按处方比例及生产工艺制备不含黄连的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，精密吸取10μl进样，测定，结果表明阴性对照溶液无干扰。
2.5线性关系考察精密吸取对照品溶液(35μg/m1)5、10、15、20、25μl，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量(ng)为横坐标绘制标准由线，计算得回归方程：A=7.081×102C-7.7×102(r=0.9992)，说明盐酸小檗碱对照品在175～875ng范围内呈良好的线性关系。
, 百拇医药
2.6 精密度试验精密吸取上述对照品溶液10μl，重复进样5次，测定峰面积，其RSD=1.7%，结果说明精密度良好。
2.7 重复性试验取批号20050329样品5份，按供试品溶液的制备项下操作，精密吸取10μl进行测定，其RSD=3.1%，结果表明重复性良好。
2.8 加样回收率试验精密吸取同批号(20050408)已知含量为(3.45mg/ml)的冰黄液样品1ml共5份，分别加入浓度为3.5,g/ml的盐酸小檗碱对照品溶液1ml，按供试品溶液的制备项下操作，精密吸取10μl进行测定。(见表1)
2.9 样品含量测定取样品3批，按供试品溶液的制备项下方法操作，精密吸取10μl进样测定结果。(见表2)
3 讨论
冰黄液每ml含黄连药材0.15g，药典规定黄连药材中盐酸小檗碱(c20H1704·Hcl)含量不得少于3.6%，考虑到生产的消耗，按转移率为60%计算，每ml中含盐酸小檗碱为3.24mg，根据以上三批样品的测定结果，将本品每m1中含盐酸小檗碱暂定为不低于3.0mg。本方法简单、灵敏、重复性好、结果准确，可作为冰黄液质量标准含量测定的测定方法。
参考文献
1 国家药典委员会，《中国药典》2005年版一部[S]，北京：人民卫生出版社，2005：591—592。
[基金项目]湖南省中医管理局中医药科研基金项目(编号：96321)
(责任审校：杨翊君), 百拇医药(彭红卫)
【关键词】HPLC；冰黄液；盐酸小檗碱；含量测定
【中图分类号】R931 【文献标识码】C【文章编号】1005-0515(2010)004-008-02
冰黄液是由黄连、大黄、人工牛黄、郁金、石菖蒲、冰片等中药组成，具有清热解毒、醒神开窍、化痰凉血、通腑排毒之功效，通过直肠滴注给药，用于治疗中风急性脑出血。方中黄连为君药，盐酸小檗碱是其主要有效成分，因此选择盐酸小檗碱作为定量分析指标成分，并采用HPLC法建立盐酸小檗碱的含量测定方法，为制定冰黄液质量标准提供参考。
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1 实验材料
1.1 仪器
岛津LC-10A液相色谱仪；SB2200超声清洗机(上海必能信超声有限公司)。
1.2 试药
冰黄液(批号20050329、20050408、20050509、20050516、20050523，均由本院制剂室提供)；盐酸小檗碱对照品(批号110713-200208，中国药品生物制品检定所)；甲醇、乙腈为色谱纯；水采用二次重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱：HPODS-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液(35：65)；检测波长：424nm；柱温：室温；流速：1ml/min；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。
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2.2 供试品溶液的制备精密量取本品1ml，置具塞三角烧瓶中，精密加入盐酸一甲醇(1：100)混合溶液100ml，称定重量，超声处理20min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品3.5mg，置100mI量瓶中，加盐酸一甲醇(1：100)混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.4 干扰因素考察按处方比例及生产工艺制备不含黄连的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，精密吸取10μl进样，测定，结果表明阴性对照溶液无干扰。
2.5线性关系考察精密吸取对照品溶液(35μg/m1)5、10、15、20、25μl，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量(ng)为横坐标绘制标准由线，计算得回归方程：A=7.081×102C-7.7×102(r=0.9992)，说明盐酸小檗碱对照品在175～875ng范围内呈良好的线性关系。
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2.6 精密度试验精密吸取上述对照品溶液10μl，重复进样5次，测定峰面积，其RSD=1.7%，结果说明精密度良好。
2.7 重复性试验取批号20050329样品5份，按供试品溶液的制备项下操作，精密吸取10μl进行测定，其RSD=3.1%，结果表明重复性良好。
2.8 加样回收率试验精密吸取同批号(20050408)已知含量为(3.45mg/ml)的冰黄液样品1ml共5份，分别加入浓度为3.5,g/ml的盐酸小檗碱对照品溶液1ml，按供试品溶液的制备项下操作，精密吸取10μl进行测定。(见表1)
2.9 样品含量测定取样品3批，按供试品溶液的制备项下方法操作，精密吸取10μl进样测定结果。(见表2)
3 讨论
冰黄液每ml含黄连药材0.15g，药典规定黄连药材中盐酸小檗碱(c20H1704·Hcl)含量不得少于3.6%，考虑到生产的消耗，按转移率为60%计算，每ml中含盐酸小檗碱为3.24mg，根据以上三批样品的测定结果，将本品每m1中含盐酸小檗碱暂定为不低于3.0mg。本方法简单、灵敏、重复性好、结果准确，可作为冰黄液质量标准含量测定的测定方法。
参考文献
1 国家药典委员会，《中国药典》2005年版一部[S]，北京：人民卫生出版社，2005：591—592。
[基金项目]湖南省中医管理局中医药科研基金项目(编号：96321)
(责任审校：杨翊君), 百拇医药(彭红卫)