瘦素对脂变肝细胞脂蛋白脂酶基因表达的影响(3)
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参见附件。
表2 引物序列
2.7 统计学处理:
计量资料均以 ±s表示,先进行方差齐性检验,如具有方差齐性,采用方差分析,多个样本均数间的两两比较采用SNK-q检验;方差不齐则采用秩和检验。所有数据均采用SPSS12.0 for windows统计软件进行分析,以P<0.05为有统计学意义。
实验结果
1 油红O染色:
正常组肝细胞油红O染色后,光镜下观察:肝细胞形态正常,为多边形,胞核蓝染,胞膜界限清楚,胞浆内未见脂滴。模型组肝细胞系用含体积分数10%医用脂肪乳注射液和10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基孵育人肝L-02细胞24小时,油红O染色显示胞浆内见大量红色的小泡性脂滴,肝细胞肿大,细胞核位于细胞中央,符合肝细胞小泡性脂肪变性特征(见图1,2)。高效液相测定细胞内甘油三酯含量,正常组与模型组比较,细胞内甘油三酯含量由0.417±0.045mmol/g蛋白上升至1.612±0.104mmol/g蛋白,明显增高,差别有统计学意义(p<0.01)。瘦素处理组及阳性对照组细胞浆内仅少量红色的小泡性脂滴(见图3,4)。
2 瘦素处理细胞内甘油三酯含量的变化
瘦素(10-7mol/ L)分别加入正常肝细胞组及模型组中,处理24小时后高效液相色谱分析结果发现:瘦素处理组及阳性对照组细胞内甘油三酯含量分别为,0.648±0.023mmol/g蛋白,0.865±0.143mmol/g蛋白,与模型组比较明显降低,差别有统计学意义(p<0.05)(见表3)。
3.瘦素对肝细胞LPL mRNA表达的影响
为进一步研究瘦素降低细胞内甘油三酯与LPL mRNA水平上表达的关系。我们采用了半定量RT-PCR法检测了人肝L-02细胞的LPL mRNA水平。结果显示,经瘦素处理后,较模型组相比,LPL mRNA表达明显上升,有统计学意义。(见图5, P<0.05)
讨论
脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase(LPL))分布于全身多种组织 ,而以脂肪和肌肉组织中的活性最高。脂蛋白脂酶在肌肉和脂肪组织的细胞中合成后 ,经过一系列的细胞内加工 ,如折叠、活化和糖化 ,再分泌出胞。经浓度梯度的转运 ,胞外的脂蛋白脂酶在血管内皮的表面与粘多糖类物质结合 ,在血管的内腔面与血浆中的底物直接接触 ,迅速分解乳糜微粒和VLDL中的甘油三酯 ,使得生成的脂肪酸进入细胞内参与能量代谢 (肌肉中 )或重新合成甘油三酯储存起来 (脂肪中 )。脂蛋白脂酶活性的降低,可引起高脂血症,主要为甘油三酯[1,2,3]。脂蛋白脂酶缺乏的人和鼠均表现出HDL水平的显著降低。已有研究发现LPL基因内含子3C→T突变引起高甘油三酯血症,研究者认为该突变是日本人群高甘油三酯血症的主要遗传因素[4]。
动物模型发现脂蛋白脂酶 (lipoprotein lipase(LPL))活性的降低与脂肪肝有关[5,6]。倪燕君等探讨肝脂酶(HL)和脂蛋白脂肪酶(LPL)在脂肪肝发病中的作用,结果发现,脂肪肝组与正常对照组及其他各组肝病相比,血脂明显升高,主要表现为血甘油三酯升高,肝素后血浆中HL、LPL活性显著降低,脂肪肝组患者肝组织中LPL活性亦明显降低[7]。本研究中我们以离体人肝L-02细胞株为研究对象。用含10%医用脂肪乳注射液和10%胎牛血清制备肝细胞脂肪变性模型,研究瘦素对脂变肝细胞甘油三酯含量、脂滴形成和脂蛋白脂酶基因表达的影响。结果发现,瘦素处理组与模型组相比,LPLmRNA表达明显上升,有统计学意义(P<0.05)。结果提示,瘦素可以通过影响脂蛋白脂酶活性改善脂肪变性肝细胞甘油三酯代谢。
参考文献
1.Goldberg IJ. Association of plasma lipoprotein with postheparin lipas activities. J Clin Invest, 1986,78:1523-1528.
2 郭朝阳,隋少玉,郭朝晖.脂蛋白脂酶活性与老年2型糖尿病关系的研究.中国老年病杂志,2004,24(6):510-511.
3 Nakamura T, Suehiro T,Yasuoka N,et al ......
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