微柱凝胶免疫检测技术应用于新生儿溶血病检测
【摘要】 目的 新生儿溶血病(Hemolytic Disease of Newborn,HDN)是由于孕妇体内存在与胎儿红细胞不相容性IgG血型抗体而引起的同族血型被动免疫性疾病。以ABO系统最为常见,其次为Rh系统,其他如Kell、Duffy、Kidd等系统也有报道。采用血型血清学方法检测母体IgG抗体效价,新生儿ABO、RhD血型及不完全抗体,尤其是对“O”型孕妇血清IgG抗A(B)抗体效价水平做动态监测,对预防和治疗新生儿溶血病有重要的临床意义。
【关键词】 新生儿溶血病;微柱凝胶;ABO血型;IgG抗A(B)抗体
【中图分类号】R722.18 【文献标识码】 B 【文章编号】1005-0515(2010)007-085-02
1新生儿溶血病
1.1新生儿溶血病(HDN)是一种发生在胎儿期和新生儿早期的一种自限性免疫性的与溶血有关的综合征,可引起早产、流产、死胎、新生儿胆红素脑病、智力发育不全、甚至出现残疾、死亡。HDN可由多种原因引起,如红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷、丙酮酸激酶缺乏、地中海贫血。因母婴血型不合而引起的,常见的有ABO HDN和Rh HDN。其中ABO HDN在我国新生儿血型不合的溶血病中发病率最高。有文献报道ABO HDN占HDN发病率的85.3%,其中产妇为“O”型的占93.9%。理论上“A”型或“B”型孕妇,其丈夫血型除与其同型或“O”型外,均可能发生HDN。
, http://www.100md.com
1.2ABO HDN是由于孕妇与胎儿的ABO血型不合,胎儿红细胞因某些原因进入母体,刺激母体产生IgG抗体,该免疫抗体可通过胎盘进入胎儿体内破坏胎儿红细胞,主要发生在母亲为“O”型,胎儿为“A”型或“B”型中,其临床症状主要为水肿,黄疸、肝脾肿大、贫血及核黄疸等。“O”型孕妇产前血清IgG抗体效价的检测与HDN之间关系密切,抗体效价高低与HDN的发生率呈正比。对于夫妇ABO血型不合的孕妇,最好常规在孕期内做抗体检测,对于IgG抗A或抗B效价≥1:128的孕妇,应采取必要治疗措施设法降低孕妇的IgG血清抗体。
1.3Rh母子血型不合是发生新生儿溶血病的主要原因之一, Rh HDN具有发病早、进展快、病性危重等特点,一般出生后12h之内即可发生黄疸,24h之内发生核黄疸,导致患儿的致死与致残,严重影响生存质量。Rh HDN患儿实施紧急换血治疗是一种行之有效的抢救手段。
2微柱凝胶免疫检测技术
, 百拇医药
2.1微柱凝胶(Microcolumn agglutination, MCA)技术是近年来新兴的血型血清学技术,20世纪90年代国外研制成功并应用临床,引进国内不过三四年时间。但由于方法学的诸多优点已被广泛应用于输血前血清学抗体的检查中。其原理是用符合血清学试验条件的稀释液配制一定浓度的凝胶,灌注在微柱管中,凝胶颗粒间的空隙可起到分子筛选作用,一定的离心条件使适当的孔径只允许单个红细胞通过,而凝集红细胞或已致敏红细胞(可与稀释液中抗球蛋白试剂反应)则不能通过,从而获得区分不同凝集结果的指标。凝集的红细胞浮在凝胶上层或在凝胶中散在分布,呈阳性反应;未凝集红细胞沉于凝胶底部,呈阴性结果。微柱凝胶抗球蛋白试验(MGCT)正是在此原理的基础上,在凝胶中混合抗球蛋白试剂,达到检测IgG类抗体和传统抗球蛋白法直抗和间抗试验的敏感度。
2.2孕妇IgG抗A(B)抗体效价的检测传统的试验方法是抗人球蛋白试验(Coomb’s),具有极大的临床意义。但是,由于在操作过程中需要反复洗涤红细胞,对阴性结果需要致敏红细胞确认等因素,大大限制了该试验的临床应用。微柱凝胶抗人球蛋白试验是一种新兴的试验方法,具有简便、快速、省时、省力,结果更易于观察,反应结果稳定,易于保存,并可以拍照长期保存图谱等优点。微柱凝胶抗人球蛋白试验的原理是孕妇IgG类抗体致敏的红细胞和微柱内的抗人球蛋白结合而发生凝集,不能通过凝胶微粒间隙,离心后红细胞不能达到微柱底部;而未被孕妇IgG类抗体致敏的红细胞不与微柱内的抗人球蛋白结合,离心后红细胞通过凝胶微粒间隙达到微柱底部。并且,由于离心时只有红细胞与微柱内的抗人球蛋白接触而游离血清不会与其接触,所以红细胞不用反复洗涤,孵育时间也大大缩短,只需15min,与经典方法相比,大大简化了操作步骤,缩短了孵育时间。因此,微柱凝胶抗人球蛋白试验是一种简便、快速、灵敏、准确的试验方法。
, 百拇医药
3临床
3.1ABO HDN的预防方法是:防止IgG抗A(B)效价升高,具体可采用中药治疗,以降低IgG抗体的效价。Rh HDN最有效的方法是预防Rh阴性妇女发生同种免疫,具体地说,即避免输Rh阳性血液,防止人工流产,尽可能保证第一胎存活。如果孕妇体内已有Rh抗体,并且效价>1:128,可采用单采孕妇血浆,以降低Rh抗体的效价,或者尽可能提早分娩,给婴儿换血,蓝光照射、输白蛋白等方法治疗。
3.2随着临床输血技术的不断发展与完善,人们对孕期及新生儿保健意识的加强,临床相关检测的需求逐渐增加。母子血型不合引起HDN认识的日益深入,国内外医务工作者均在关注新生儿溶血病的早期诊断和防治的研究,提倡妇幼保健网络建立新生儿溶血病的普查程序,推广早期诊断和早期治疗。HDN产前检查夫妇血型是否相合和孕妇体内是否有IgG抗体,ABO HDN通过检测孕妇机体IgG抗A(B)效价的增长情况,来判断HDN发生的可能性,Rh HDN在产前大都可以作出明确诊断。通过孕期监测估计胎儿发病程度,及时采取适当的治疗措施,引起医生对胎儿受累的警惕,确定最适分娩时间,对防止HDN的发生具有重要意义。
, 百拇医药
参考文献
1.李勇,杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M].北京:中国科学技术出版社,1999.174-175.
2.袁学敏,魏胜男,田方.ABO新生儿溶血病的血清学检查[J].检验医学与临床,2008,5(17):1050.
3.白英明,赖福才.新生儿溶血病非侵入性产前诊断研究进展[J].中国输血杂志,2008,21(3):223-225.
4.唐继光,黄庆,凌彩霞,等.孕期IgG抗体效价与新生儿溶血病的关系分析[J].现代医药卫生,2008,24(20):3042-3043.
5.范崇梅.“O”型孕妇产前血清IgG抗A(B)抗体效价与新生儿溶血病的关系[J].检验医学与临床,2009,6(2):94-97.
6.胡淑君,孙红,徐丽珍,等.母儿血型不合IgG抗体效价≥1:512是否提示胎儿病情严重[J].中华围产医学杂志,2003,6(2):82-84.
7.韦海春,黎海澜.母婴ABO血型不合新生儿溶血病与孕妇IgG抗体效价分析[J].检验医学与临床,2008,5(21):1319-1323.
8.刘小信.微柱凝胶抗人球蛋白试验检测孕妇抗A(B)IgG抗体早期诊断ABO-HDN的研究[J].预防医学论坛,2009,15(1):40-42.
(责任审校:刘春燕), 百拇医药(孙长杰 刘冰 林海兰)
【关键词】 新生儿溶血病;微柱凝胶;ABO血型;IgG抗A(B)抗体
【中图分类号】R722.18 【文献标识码】 B 【文章编号】1005-0515(2010)007-085-02
1新生儿溶血病
1.1新生儿溶血病(HDN)是一种发生在胎儿期和新生儿早期的一种自限性免疫性的与溶血有关的综合征,可引起早产、流产、死胎、新生儿胆红素脑病、智力发育不全、甚至出现残疾、死亡。HDN可由多种原因引起,如红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷、丙酮酸激酶缺乏、地中海贫血。因母婴血型不合而引起的,常见的有ABO HDN和Rh HDN。其中ABO HDN在我国新生儿血型不合的溶血病中发病率最高。有文献报道ABO HDN占HDN发病率的85.3%,其中产妇为“O”型的占93.9%。理论上“A”型或“B”型孕妇,其丈夫血型除与其同型或“O”型外,均可能发生HDN。
, http://www.100md.com
1.2ABO HDN是由于孕妇与胎儿的ABO血型不合,胎儿红细胞因某些原因进入母体,刺激母体产生IgG抗体,该免疫抗体可通过胎盘进入胎儿体内破坏胎儿红细胞,主要发生在母亲为“O”型,胎儿为“A”型或“B”型中,其临床症状主要为水肿,黄疸、肝脾肿大、贫血及核黄疸等。“O”型孕妇产前血清IgG抗体效价的检测与HDN之间关系密切,抗体效价高低与HDN的发生率呈正比。对于夫妇ABO血型不合的孕妇,最好常规在孕期内做抗体检测,对于IgG抗A或抗B效价≥1:128的孕妇,应采取必要治疗措施设法降低孕妇的IgG血清抗体。
1.3Rh母子血型不合是发生新生儿溶血病的主要原因之一, Rh HDN具有发病早、进展快、病性危重等特点,一般出生后12h之内即可发生黄疸,24h之内发生核黄疸,导致患儿的致死与致残,严重影响生存质量。Rh HDN患儿实施紧急换血治疗是一种行之有效的抢救手段。
2微柱凝胶免疫检测技术
, 百拇医药
2.1微柱凝胶(Microcolumn agglutination, MCA)技术是近年来新兴的血型血清学技术,20世纪90年代国外研制成功并应用临床,引进国内不过三四年时间。但由于方法学的诸多优点已被广泛应用于输血前血清学抗体的检查中。其原理是用符合血清学试验条件的稀释液配制一定浓度的凝胶,灌注在微柱管中,凝胶颗粒间的空隙可起到分子筛选作用,一定的离心条件使适当的孔径只允许单个红细胞通过,而凝集红细胞或已致敏红细胞(可与稀释液中抗球蛋白试剂反应)则不能通过,从而获得区分不同凝集结果的指标。凝集的红细胞浮在凝胶上层或在凝胶中散在分布,呈阳性反应;未凝集红细胞沉于凝胶底部,呈阴性结果。微柱凝胶抗球蛋白试验(MGCT)正是在此原理的基础上,在凝胶中混合抗球蛋白试剂,达到检测IgG类抗体和传统抗球蛋白法直抗和间抗试验的敏感度。
2.2孕妇IgG抗A(B)抗体效价的检测传统的试验方法是抗人球蛋白试验(Coomb’s),具有极大的临床意义。但是,由于在操作过程中需要反复洗涤红细胞,对阴性结果需要致敏红细胞确认等因素,大大限制了该试验的临床应用。微柱凝胶抗人球蛋白试验是一种新兴的试验方法,具有简便、快速、省时、省力,结果更易于观察,反应结果稳定,易于保存,并可以拍照长期保存图谱等优点。微柱凝胶抗人球蛋白试验的原理是孕妇IgG类抗体致敏的红细胞和微柱内的抗人球蛋白结合而发生凝集,不能通过凝胶微粒间隙,离心后红细胞不能达到微柱底部;而未被孕妇IgG类抗体致敏的红细胞不与微柱内的抗人球蛋白结合,离心后红细胞通过凝胶微粒间隙达到微柱底部。并且,由于离心时只有红细胞与微柱内的抗人球蛋白接触而游离血清不会与其接触,所以红细胞不用反复洗涤,孵育时间也大大缩短,只需15min,与经典方法相比,大大简化了操作步骤,缩短了孵育时间。因此,微柱凝胶抗人球蛋白试验是一种简便、快速、灵敏、准确的试验方法。
, 百拇医药
3临床
3.1ABO HDN的预防方法是:防止IgG抗A(B)效价升高,具体可采用中药治疗,以降低IgG抗体的效价。Rh HDN最有效的方法是预防Rh阴性妇女发生同种免疫,具体地说,即避免输Rh阳性血液,防止人工流产,尽可能保证第一胎存活。如果孕妇体内已有Rh抗体,并且效价>1:128,可采用单采孕妇血浆,以降低Rh抗体的效价,或者尽可能提早分娩,给婴儿换血,蓝光照射、输白蛋白等方法治疗。
3.2随着临床输血技术的不断发展与完善,人们对孕期及新生儿保健意识的加强,临床相关检测的需求逐渐增加。母子血型不合引起HDN认识的日益深入,国内外医务工作者均在关注新生儿溶血病的早期诊断和防治的研究,提倡妇幼保健网络建立新生儿溶血病的普查程序,推广早期诊断和早期治疗。HDN产前检查夫妇血型是否相合和孕妇体内是否有IgG抗体,ABO HDN通过检测孕妇机体IgG抗A(B)效价的增长情况,来判断HDN发生的可能性,Rh HDN在产前大都可以作出明确诊断。通过孕期监测估计胎儿发病程度,及时采取适当的治疗措施,引起医生对胎儿受累的警惕,确定最适分娩时间,对防止HDN的发生具有重要意义。
, 百拇医药
参考文献
1.李勇,杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M].北京:中国科学技术出版社,1999.174-175.
2.袁学敏,魏胜男,田方.ABO新生儿溶血病的血清学检查[J].检验医学与临床,2008,5(17):1050.
3.白英明,赖福才.新生儿溶血病非侵入性产前诊断研究进展[J].中国输血杂志,2008,21(3):223-225.
4.唐继光,黄庆,凌彩霞,等.孕期IgG抗体效价与新生儿溶血病的关系分析[J].现代医药卫生,2008,24(20):3042-3043.
5.范崇梅.“O”型孕妇产前血清IgG抗A(B)抗体效价与新生儿溶血病的关系[J].检验医学与临床,2009,6(2):94-97.
6.胡淑君,孙红,徐丽珍,等.母儿血型不合IgG抗体效价≥1:512是否提示胎儿病情严重[J].中华围产医学杂志,2003,6(2):82-84.
7.韦海春,黎海澜.母婴ABO血型不合新生儿溶血病与孕妇IgG抗体效价分析[J].检验医学与临床,2008,5(21):1319-1323.
8.刘小信.微柱凝胶抗人球蛋白试验检测孕妇抗A(B)IgG抗体早期诊断ABO-HDN的研究[J].预防医学论坛,2009,15(1):40-42.
(责任审校:刘春燕), 百拇医药(孙长杰 刘冰 林海兰)