高效液相色谱法测定伤愈口服液中阿魏酸含量
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【摘要】目的 建立治伤愈口服液中阿魏酸含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定有关物质, Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm* 250mm,5 μm),以甲醇一1 %冰醋酸溶液(35;65)为流动相。检测波长:313 nm,流速:1m1/min .柱温为室温。结果 阿魏酸在0.024-1.92μg与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998)。结论 该方法简便、快速、准确、重复性好,可作为伤愈口服液的质量控制方法。
【关键词】 高效液相色谱法;伤愈口服液;阿魏酸
【中图分类号】R927.1 【文献标识码】 A 【文章编号】1005-0515(2010)007-112-01
伤愈口服液是某药厂拟报批中成药,主要成分有由当归、赤芍、牛膝、甘草、川芎等,具有行瘀活血、疏肝行气、缓急止痛之功效,主治胸中血瘀、血行不畅等症。[1]本研究采用高效液相色谱法测定伤愈口服液中阿魏酸含量,现报到如下。
1 材料与方法
1.1 材料 LC-10AT型高效液相色谱仪(日本岛津),SPD-10A紫外检测器(日本岛津);FA2004电子天平(上海方瑞仪器有限公司);试剂:阿魏酸标准品 (中国药品生物制品鉴定所,批号10773200613 );伤愈口服液;甲醇、冰醋酸溶液。
1.2 方法
1.21 色谱条件 采用高效液相色谱法测定有关物质, Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm* 250mm,5 μm),以甲醇一1 %冰醋酸溶液(35;65)为流动相。检测波长:313 nm,流速:1m1/min .柱温为室温。
1.22 溶液制备 供品液的制备:精密量取伤愈口服溶液10ml,置于分液漏斗中,加水10ml,摇匀,用稀盐酸调PH2-3,再用乙醚提取3次,每次20ml,合并提取液,蒸干。残渣用甲醇溶解于25ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀。
对照品的制备:精密称取对照品阿魏酸2.4mg,置于50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度50ml 处),摇匀。
阴性对照液的制备:按照治伤愈口服液制备工艺要求制成不含伤愈有效成分的成品。取该样本10ml,置于分液漏斗中,加水稀释至10ml,摇匀,用稀盐酸调PH2-3,再用乙醚提取3次,每次20ml,合并提取液,蒸干。残渣用甲醇溶解于25ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀。
1.23 测定数据 采用高效液相色谱法,严格按照说明书操作,进行系统适用性试验、并对线性关系进行考察:精密吸取对照品进样,进样量分别为0.5、2、5、15、20、30、40μl。以阿魏酸对照品进样量为横坐标(X),以峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线。取阿魏酸供试品溶液、对照品各进样15μl,依色谱条件测定峰面积,根据峰面积值,计算样品阿魏酸的含量。
2结果
2.1适用性试验 阿魏酸对照品、伤愈口服液待测品在200-400 nm波长进行扫描,阿魏酸在313nm波长处有最大吸收,阴性样品溶液在此无吸收。
2.2线性关系考察 进样量分别为0.5、2、5、15、20、30、40μl。以阿魏酸对照品进样量为横坐标(X),以峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线,得Y=5448.1X+49.775,r=0.9998,结果表明阿魏酸在0.024- 1.92 g进样范围内其峰面积与浓度有良好的线性关系。
2.3 样品含量测定.
治伤灵口服液中阿魏酸含量测定的结果(n=5)
3讨论
色谱法是一种分离方法,它利用物质在两相中分配系数的微小差异,当两相作相对移动时,使被测物质在两相之间进行反复多次分配,这样使原来的微小分配差异产生了很大的效果,使各组分分离.以达到分离、分析及测定一些物理化学常数的目的。
伤愈(治伤灵)口服液是某药厂拟报批中成药,主要成分为赤芍、当归、牛膝、川芎、甘草等。伤愈口服液有效成分较为复杂,阿魏酸为有机弱酸,有资料显示,色谱法测定阿魏酸,在阿魏酸中加人少量冰醋酸改善阿魏酸主峰与前后的小杂质峰分离。故本实验中除采用甲醇还在流动相中加入了冰醋酸。伤愈口服液处方中含阿魏酸的药材主要是当归和川芎,但有资料显示[2],红花 、牛膝、甘草中也含有了微量的阿魏酸,故实验中制备阴性对照液是应予以注意,阴性对照溶液应除去了川芎、当归、红花、甘草、牛膝五味药制成 ......
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