结核菌检测技术比较分析
【中图分类号】R446.5【文献标识码】B【文章编号】1005-2720(2009)04-0222-02
肺结核病是人体感染结核杆菌以后，发生的慢性传染病。任何一种传染病都有它特定的病原体，只有找到病原体或检测到病原体的标志物(所谓标志物即病原体侵入人体内以后，在体内产生的特有的可以表示该病原体的物质，如抗体等等)，对该疾病的诊断才算真正确立。诊断肺结核，在痰中找结核杆菌这是一个最简单、最快捷、最经济也是最正确的方法。从国家预防和治疗肺结核的流行病学指标看，肺结核病痰细菌学检查摆到了很重要的位置，比如：涂阳患病率、涂阳登记率等都是以痰中找结核菌为基础的重要指标。每一个肺结核门诊病人，都必须痰中找结核菌，找到了结核菌不仅能最终确诊结核病，它还是进行结核病预防、治疗以及判断结核病病情、预后的依据。现用结核菌涂片检查、结核菌培养和PCR技术二种方法做对照，分析比较如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料：研究对象为来我防治所就诊的患者。按不同的部位采取不同的标本。其中痰例43例，尿31例，胸水24例，腹水8例，分泌物6例，脑积液5例，支气管灌洗液6例，脓汁5例，关节腔积液3例，共计131例。
, 百拇医药
1.2 检测方法：用同—份标本同时做涂片、培养、PCR查结核菌。首先按结核菌检查方法规程做涂片、培养，然后进行PCR检测。涂片经染色后，高倍镜下镜检，发现抗酸杆菌报阳性，300个视野未发现抗酸杆菌报阴性。培养结核杆菌接种改良罗氏培养基，37℃培养2个月，生长抗酸杆菌为阳性，未生长为阴性，PCR检测将标本经消化、离心、洗涤、破壁后，取DNA经94℃-65℃-35℃，循环扩增，取扩增产物用2%的琼脂糖凝胶电泳，在紫外光下观察，240bp处出现橙黄色条带为阳性。
2 结果
131例标本中PCR阳性73例，阳性率55.73%；涂片阳性34例，阳性率25.95%；结核菌培养阳性26例，阳性率19.85%。经统计学处理，PCR法与涂片法有显著性差异(P<0.01)，涂片法与培养法无显著性差异(P>0.05)。
3 讨论
提高结核菌检出率要从检验人员的素质、标本如何采集等几个重要方面入手。查找痰中的结核菌是一项耐心细致的工作，只要在工作上疏忽大意就有可能使痰菌的检出率下降。一般认为，痰涂片阳性的病人的含菌量100万个/ml左右，而在涂片时在涂片上的细菌数就比较少了，因为在涂片时只是在载坡片上只涂上薄薄一层。所以，要求检验人员在显微镜下查痰菌时必须仔细搜索每一个镜下视野，至少搜索100~300个视野。如果能做到一丝不苟，痰结核菌的检出率就会大大提高。
, 百拇医药
标本的采集：当肺部结核病灶与支气管相通时，咳出的痰中含菌量就较高。提高标本中结核菌的检出率的正确操作方法应该是：在采集标本前，患者应以沾水漱口，这样可以去掉口腔内的大部分染菌，然后鼓励病人用力咳嗽(如有出血危险的病人应避免用力咳嗽)，尽力将气管深部的痰液咳出，并将咳出的痰液放于清洁(最好消毒过的)容器内并加盖，马上送检验室，直接涂片检查。采集痰液的最好时间是清晨起床时咳出的痰。另一个必须注意的问题是，有的病人无痰，咳嗽也很少，而为了应付查痰就将唾沫作为痰标本进行检查，这样的痰标本、结核菌的检出率很低，甚至根本检测不到结核菌，报告结果肯定是阴性的，这样的检验结果是不正确的，也绝对不可靠。
结核菌检测临床意义是通过涂片检查到抗酸杆菌，可初步诊断为结核病，同时应做结核分枝杆菌培养与其他分枝杆菌的鉴别。痰结核菌检查，可以根据显微镜下每个视野的菌量的多少，来判断每位病人排菌量大小，判定治疗效果。由于结核菌属于缓慢生长需氧的抗酸杆菌，营养要求高，在培养基中要有血清、卵黄、甘油、天门冬素及马铃薯等物质条件，温度必须在37~37.5℃，pH值为6.5~7.0的酸碱度，才缓慢生长。在培养基上生长2～8w以后才可以用肉眼看见菌落，如果碰到耐药菌株可能在20w以上才能培养成可见菌落。
, http://www.100md.com
对结核菌的检验，用得最多的方法是，直接厚涂片染色后在显微镜下检测，还有将痰液离心沉淀、漂浮集菌等处理后，再进行涂片检测，这些方法都必须由专业人员操作。如果培养出结核分枝杆菌或PCR技术检测TB-RNA阳性即可确诊为结核病，阳性常见于各种结核病。本组结果三种方法比较PCR法明显优于其他两法，它有灵敏、快速的优点，是结核诊断理想的方法。
【参考文献】
[1] 许淑珍，闫东辉.加强结核分枝杆菌的检验[J].中华检验医学杂志，2001，2：126~128.
[2] 中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程[J].中国防痨杂志，1996，18：30.
[收稿 2009-01-08], 百拇医药(杨 平 赵 牧)
肺结核病是人体感染结核杆菌以后，发生的慢性传染病。任何一种传染病都有它特定的病原体，只有找到病原体或检测到病原体的标志物(所谓标志物即病原体侵入人体内以后，在体内产生的特有的可以表示该病原体的物质，如抗体等等)，对该疾病的诊断才算真正确立。诊断肺结核，在痰中找结核杆菌这是一个最简单、最快捷、最经济也是最正确的方法。从国家预防和治疗肺结核的流行病学指标看，肺结核病痰细菌学检查摆到了很重要的位置，比如：涂阳患病率、涂阳登记率等都是以痰中找结核菌为基础的重要指标。每一个肺结核门诊病人，都必须痰中找结核菌，找到了结核菌不仅能最终确诊结核病，它还是进行结核病预防、治疗以及判断结核病病情、预后的依据。现用结核菌涂片检查、结核菌培养和PCR技术二种方法做对照，分析比较如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料：研究对象为来我防治所就诊的患者。按不同的部位采取不同的标本。其中痰例43例，尿31例，胸水24例，腹水8例，分泌物6例，脑积液5例，支气管灌洗液6例，脓汁5例，关节腔积液3例，共计131例。
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1.2 检测方法：用同—份标本同时做涂片、培养、PCR查结核菌。首先按结核菌检查方法规程做涂片、培养，然后进行PCR检测。涂片经染色后，高倍镜下镜检，发现抗酸杆菌报阳性，300个视野未发现抗酸杆菌报阴性。培养结核杆菌接种改良罗氏培养基，37℃培养2个月，生长抗酸杆菌为阳性，未生长为阴性，PCR检测将标本经消化、离心、洗涤、破壁后，取DNA经94℃-65℃-35℃，循环扩增，取扩增产物用2%的琼脂糖凝胶电泳，在紫外光下观察，240bp处出现橙黄色条带为阳性。
2 结果
131例标本中PCR阳性73例，阳性率55.73%；涂片阳性34例，阳性率25.95%；结核菌培养阳性26例，阳性率19.85%。经统计学处理，PCR法与涂片法有显著性差异(P<0.01)，涂片法与培养法无显著性差异(P>0.05)。
3 讨论
提高结核菌检出率要从检验人员的素质、标本如何采集等几个重要方面入手。查找痰中的结核菌是一项耐心细致的工作，只要在工作上疏忽大意就有可能使痰菌的检出率下降。一般认为，痰涂片阳性的病人的含菌量100万个/ml左右，而在涂片时在涂片上的细菌数就比较少了，因为在涂片时只是在载坡片上只涂上薄薄一层。所以，要求检验人员在显微镜下查痰菌时必须仔细搜索每一个镜下视野，至少搜索100~300个视野。如果能做到一丝不苟，痰结核菌的检出率就会大大提高。
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标本的采集：当肺部结核病灶与支气管相通时，咳出的痰中含菌量就较高。提高标本中结核菌的检出率的正确操作方法应该是：在采集标本前，患者应以沾水漱口，这样可以去掉口腔内的大部分染菌，然后鼓励病人用力咳嗽(如有出血危险的病人应避免用力咳嗽)，尽力将气管深部的痰液咳出，并将咳出的痰液放于清洁(最好消毒过的)容器内并加盖，马上送检验室，直接涂片检查。采集痰液的最好时间是清晨起床时咳出的痰。另一个必须注意的问题是，有的病人无痰，咳嗽也很少，而为了应付查痰就将唾沫作为痰标本进行检查，这样的痰标本、结核菌的检出率很低，甚至根本检测不到结核菌，报告结果肯定是阴性的，这样的检验结果是不正确的，也绝对不可靠。
结核菌检测临床意义是通过涂片检查到抗酸杆菌，可初步诊断为结核病，同时应做结核分枝杆菌培养与其他分枝杆菌的鉴别。痰结核菌检查，可以根据显微镜下每个视野的菌量的多少，来判断每位病人排菌量大小，判定治疗效果。由于结核菌属于缓慢生长需氧的抗酸杆菌，营养要求高，在培养基中要有血清、卵黄、甘油、天门冬素及马铃薯等物质条件，温度必须在37~37.5℃，pH值为6.5~7.0的酸碱度，才缓慢生长。在培养基上生长2～8w以后才可以用肉眼看见菌落，如果碰到耐药菌株可能在20w以上才能培养成可见菌落。
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对结核菌的检验，用得最多的方法是，直接厚涂片染色后在显微镜下检测，还有将痰液离心沉淀、漂浮集菌等处理后，再进行涂片检测，这些方法都必须由专业人员操作。如果培养出结核分枝杆菌或PCR技术检测TB-RNA阳性即可确诊为结核病，阳性常见于各种结核病。本组结果三种方法比较PCR法明显优于其他两法，它有灵敏、快速的优点，是结核诊断理想的方法。
【参考文献】
[1] 许淑珍，闫东辉.加强结核分枝杆菌的检验[J].中华检验医学杂志，2001，2：126~128.
[2] 中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程[J].中国防痨杂志，1996，18：30.
[收稿 2009-01-08], 百拇医药(杨 平 赵 牧)