两种方法处理乳汁检测HBVDNA结果比较
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【中图分类号】R446.62【文献标识码】【文章编号】1005-2720(2009)04-0224-01
产妇乳汁HBVDNA定量检测有助于临床医生正取指导孕妇的喂养方式。现就实验室两种处理乳汁方法检测HBVDNA的效果，介绍如下：
1 材料与方法
1.1 乳汁来源：从2006年7月~2008年10月在市妇幼保健院分娩的产妇均为血清HBsAg阳性，丙氨酸转氨酶正常，取其分娩24h内的初乳，先用温水清洗乳头，然后轻轻挤出乳汁3ml，置于无菌干燥管送检。
1.2 HBVDNA定量检测试剂盒由中山大学达安基因公司提供，试剂盒的检出限度为1.0×103拷贝。
1.3 方法：①方法1：不做任何处理直接检测。先取乳汁750μl于一个无菌eppendorf管内；然后4℃15000r/min离心10min，弃去上清液，最后加上40μlDNA提取液。②方法2：4℃冰箱过夜，100g/lPEG处理后检测。4℃冰箱过夜后，从中间层取乳汁750μl于一个无菌eppendorf管中，加等量100g/LPEG混合，然后4℃ 15000r/mim离心10min，弃去上清液，最后加上40μlDNA提取液。
1.4 检测仪器和方法：应用国产博日荧光定量PCR检测仪进行荧光定量PCR检测乳汁HBVDNA。
2 结果
见表1。
3 讨论
为了提高检测乳汁HBV DNA灵敏度，进行乳汁处理方法的研究是必要的。4℃冰箱过夜可以使乳汁中的乳酪上浮到最上层，DNA集中于中间的乳白色层，取样时容易获得DNA含量高的乳汁标本；否则所取样的标本含有比较多的乳酪，会影响DNA的提取。PEC液有沉淀DNA的作用，经高速离心获得DNA沉淀，易于被DNA提取液抽提从而提高检测灵敏度。因此，4℃冰箱过夜且100g/L PEC液处理乳汁后可提高HBV DNA检测灵敏度，值得临床推广应用。
[收稿 2008-12-23]
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