结核菌培养方法、耐药性及存活时间的研究
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【中图分类号】R446.5【文献标识码】A【文章编号】1005-2720(2009)15-0593-02
【摘要】目的：了解Dipasic对耐药菌株是否有效及其药物抑菌浓度。方法：药敏培养基内加入10种不同浓度抗结核药物，加入结核菌菌液10~3mg。结果：4w后观察3种抗结核药物耐药情况。结论：DPC是一种独立的抗结核药物，对耐药结核菌都有效，但在1μg浓度时仍有30%生长，认为用药量应加倍。
【关键词】结核菌培养方法；耐药性；存活时间；结核菌试验
抗结核药物的使用，在结核病防治上起了划时代的作用。50年代采用INH+PAS联合治疗，取得了较好疗效。但PAS服用量大，消化道反应多，病人不能耐受，90%不能完成治疗疗程。瑞士Geistlich药厂研制的Dipasic(简称DPC)(德国又名GEWO399)，它是以特殊方法将INH与PAS合成的化合物。它能代替INH+PAS联合用药，增加疗效，不良反应明显比PAS为少。德国Freudenthal等50余位专家均有Dipasic临床应用的报告，认为有效，但无Dipasic耐药性的报道。当前，我国耐药性病人不断增加，寻求合理用药，是当务之急，为此笔者对Dipasic作耐药性研究，目的在于了解Dipasic对耐药菌株是否有效、Dipasic的药物抑菌浓度如何，以便研究用量与用法，提高临床疗效。
1 研究方法
对山东菏泽市立医院的门诊及病房肺结核病人的痰进行结核菌培养，无论病人是初治或复治，亦不分男女老少，凡痰菌培养阳性者，即作为研究对象。结核菌的检验，按标准常规操作进行。药敏培养基的制备：液体鸡蛋培养基内，按比例加入抗结核药物，其浓度按我国药敏标准，如INH、PAS、TB1，每毫升分别为1μg及10μg，SM、KM、CPM分别为10μg，RFP及RFD分别为50μg及250μg，EMB为5μg及50μg。Dipasic则暂定为每毫升含药0.1μg、0.5μg、1.0μg及10μg 4种。加入药物后，充分摇匀混合后，分装在中试管内，每管5ml，摆成斜面，进行85~90℃ 1h凝固灭菌，24h后再灭菌1次，制成的含药培养基，保存在冰箱，1个月内有效。菌液制备：取培养基上生长1个月内的菌落，于磨菌器内灭菌生理盐水研磨呈均匀的菌液，再加灭菌盐水稀释，与标准管比较(制成每毫升含1ml的菌液)，最后100倍稀释成每毫升含10~2mg菌液备用。菌液接种：将含不同浓度的含药培养基顺序排列，并有不含药物的培养基作为对照。取每毫升含10~2mg的菌液，每管接种0.1ml，接种菌量为10~3mg的菌液，放在37℃温箱内培养，每周观察1次，4w报告结果。报告的标准是：如培养基上无菌生长者为(-)，培养基上有菌落数在50个以下者为(+)，培养基上菌落数50个以上，但无融合者为(++)，培养基上菌落大部分融合者为(+++)。
2 研究结果
笔者研究的10种抗结核药物耐药性试验，这10种抗结核药物是：INH、PAS、DPC、TB1、EMB、RFP、RFD、SM、KM及CPM，围绕本文目的，笔者仅取30例病人的其中INH、PAS及DPC 3种药物的耐药性进行分析，其他另行报道。INH、PAS的浓度，按国家耐药性标准，分为1μg及10μg，以每毫升1μg为耐药上界，1μg药浓下不能生长者为阴性，为敏感菌。1μg生长者为阳性，为耐药菌。DPC的浓度，由于尚需寻求合适的抑菌浓度，故分为每毫升含药0.1μg、0.5μg、1.0μg及10μg 4种不同的浓度。为便于统计比较，暂以1μg作为耐药标准，1μg以下者为敏感，1μg以上者为耐药。见表1、2、3。
从表1可见耐INH菌株已达90%，耐DPC菌株为33.3%，经统计学处理，χ2=27.44，P<0.001，有显著性差异。PAS与DPC比较，经统计学处理，校正卡方为0.062，P>0.05，无显著性差异。
表1和表2可以说明INH、PAS、DPC为3种不同的抗结核药物，他们对不同的结核菌有不同的敏感与耐药情况。从8例耐PAS菌株中发现，此8例同时有抗3种结核药物的耐药菌株，耐DPC菌株10例中，也有此一现象，是多种耐药性菌株。
从表3可见，DPC抑菌浓度，1μg时尚有9例培养仍可生长，10μg时有6.7%培养阳性。
3 讨论
过去，有人认为DPC是一种INH+PAS的混合物，笔者的研究证明从耐药性及耐药程度分析，DPC是独立的一种抗结核药物，是INH与PAS的一种化合物，当前，我国耐INH菌株已达90%，这样的耐药性仍在广泛应用，是否降低疗效，值得重视。INH耐药后，是否致病力全均下降，从笔者的结核菌培养后生长时间看，并未发现耐药菌的生长延缓。从统计学看来，耐INH菌株，应用DPC仍有效，差异有高度显著性。因此，DPC可否作为另一种抗结核药物与RFP、RFD等联合应用，关键在于DPC是否像PAS那样，对RFP、RFD吸收有障碍，会降低RFP的血浓度，降低疗效。如果DPC并没有PAS这一代谢现象，则DPC作为另一抗结核药物，其应用前景就较为广阔了。Kowilsky氏测定DPC服用后血浓度的记载，用DPC与INH同量时，血浓度1h 5.8mg/L，3h 6mg/L，7h 4.56mg/L，12h 2.6mg/L，14h 2mg/L，其认为DPC明显优于INH，其优点是：①DPC排泄慢，INH12h血浓度仅有0.003mg/L，而KPC仍有2.6mg/L，14h时INH浓度已为“0”，KPC仍高达2mg/L ......
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