烟碱对油酸型ALI/ARDS大鼠血液中IL-6及肺组织中NF-κB 表达的影响
【中图分类号】R605【文献标识码】A【文章编号】1005-2720(2009)34 - 1635 - 02
【摘要】目的 探讨烟碱激活胆碱能抗炎通路对ALI/ARDS的治疗作用及其机制。方法 采用油酸型ALI/ARDS大鼠模型。将32只大鼠随机分为4组:对照组、ARDS组、烟碱处理组(烟碱组)和烟碱加α-银环蛇毒素组(蛇毒素组)共四组,每组8只。实验中测动脉氧分压、ELISA法测各组大鼠血液中IL-6的浓度,免疫组化法测肺组织NF-κB p65的值。结果 烟碱组与ARDS组及蛇毒素组相比病理改变明显较轻. 以下各指标:氧分压(PO2)、IL-6的浓度、NF-κB p65的表达,烟碱组与ARDS组及蛇毒素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 烟碱通过作用于烟碱受体的α7亚基激动胆碱能抗炎通路,能明显减少炎症因子的表达,对肺组织具有保护作用。
【关键词】烟碱;胆碱能抗炎通路;α7亚基烟碱受体;TNF-α;NF-κB
, 百拇医药
烟碱是胆碱能受体的天然激动剂,已证明烟碱可以激活胆碱能抗炎通路,抑制炎性反应,对以SIRS为主要特征的疾病有保护作用[1]。但是这一通路激活对ALI/ARDS作用如何尚无报道。本研究拟通过复制ALI/ARDS动物模型,观察烟碱是否具有抗ALI/ARDS作用,及其作用的分子机制。为开发烟碱的治疗用途、寻找ALI/ARDS的新型防治手段提供实验依据。
1 材料与方法
1.1实验动物的制备及分组
健康雄性Wistar大鼠,体重180～250g(由郑州大学实验动物中心提供,批号SCXK豫2005-0001)。32只大鼠随机分为对照组、ARDS组、烟碱处理组(烟碱组)和烟碱加α-银环蛇毒素组(蛇毒素组)共4组,每组8只。大鼠模型的制备参考文献[2]。动物术前禁食12h,腹腔注射20%乌拉坦1g/kg麻醉后,经尾静脉注入油酸0.1ml/kg。对照组麻醉后经尾静脉注入生理盐水0.1ml/kg。烟碱组和蛇毒素组模型制备成功后参考文献[3]立即腹腔注射烟碱400µg/kg,之后每间隔8 h追加注入1次,连续3次至第24小时。对照组和ARDS组则于相应时间点腹腔注射等量生理盐水.
, 百拇医药
1.2 检测指标与方法
1.2.1动脉氧分压分析模型制备成功后4 h经颈动脉采集血样1.0 ml,应用血气分析仪测定动脉血氧分压(PaO2)。
1.2.2血浆IL-6浓度测定模型制备成功后4 h通过颈动脉抽血0.8ml,加入EDTA抗凝管;离心(3000×g 4℃)15 min后,取上清保存于-70℃,待检。采用酶联免疫吸附法测定。操作步骤严格按试剂盒说明书进行。以pg/ml表示。每个待测样品及标准品均作复孔检测。
1.3.3 肺组织NF-κB p65的测定石蜡切片上测NF-κB、的免疫组化表达,阳性反应为胞浆中出现棕黄色颗粒。结果判断每张切片在高倍镜下选择2个视野,记数每20个细胞中阳性细胞个数,取其平均值作为该标本的NF-KB染色阳性率。NF-KB细胞阳性率以阴性,阳性,强阳性3个等级表示。
1.4 统计学处理
, http://www.100md.com
采用SPSS 10.0统计软件进行分析处理,资料以均数±标准差(X±s)表示。组间比较采用单因素方差分析,独立样本间采LSD-T检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1氧分压
对照组为(113.5±5.5)mmHg,ARDS组为(83.0±5.2) mmHg,烟碱组为(109.1±7.7)mmHg,蛇毒素组为(82.0±5.3)mmHg。烟碱组与ARDS组及蛇毒素组均值相比差异有统计学意义(P< 0.05)。
2.2 血浆IL-6的浓度
对照组为(193.9±21.5)pg/ml,ARDS组为(354.2±47.6)pg/ml,烟碱组为(220.3±28.0)pg/ml,蛇毒素组为(330.5±33.6)pg/ml。烟碱组血浆IL-6浓度明显低于ARDS组及蛇毒素组,差异有统计学意义(P<0.05)。
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2.3 肺组织NF-κB p65的测定结果
免疫组化示烟碱组NF-κB p65为阳性,ARDS组为强阳性,对照组为阴性,蛇毒素组为强阳性.
3 讨 论
本研究证明烟碱激活胆碱能抗炎通路可明显降低IL-6、NF-κB p65在体内的表达,提高氧分压,减轻肺水肿。对肺组织的保护作用明显,减少了炎症因子的表达,减轻了全身炎症反应,对ALI/ARDS的治疗作用明显。胆碱能抗炎通路的发现为抗炎治疗提供了一条崭新的途径,研究开发安全有效的拟胆碱药物,将是未来研究的热点。
【参考文献】
[1] Lhur Or,Antonsen k,karlsson M,et al.And the ARF study group.incidence and mortality after acute respiratory failure and acute respiratory distress syndrome in sweden,denmark,and Iceland[J].Am J Respir Crit Care Med,1999,159:1849-1861.
[2] 陆月明.油酸致急性肺损伤动物模型析评[J].中华急诊医学杂志,2005,14(1):81.
[3] Hong W,MAN Y, MahendarO,et al. Nicotinic acetylcholine receptor asubunit is an essential regulator of inflammation [J].Nature,2003,421: 384-388, http://www.100md.com(刘鸿飞 李宏云 秦 超)
【摘要】目的 探讨烟碱激活胆碱能抗炎通路对ALI/ARDS的治疗作用及其机制。方法 采用油酸型ALI/ARDS大鼠模型。将32只大鼠随机分为4组:对照组、ARDS组、烟碱处理组(烟碱组)和烟碱加α-银环蛇毒素组(蛇毒素组)共四组,每组8只。实验中测动脉氧分压、ELISA法测各组大鼠血液中IL-6的浓度,免疫组化法测肺组织NF-κB p65的值。结果 烟碱组与ARDS组及蛇毒素组相比病理改变明显较轻. 以下各指标:氧分压(PO2)、IL-6的浓度、NF-κB p65的表达,烟碱组与ARDS组及蛇毒素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 烟碱通过作用于烟碱受体的α7亚基激动胆碱能抗炎通路,能明显减少炎症因子的表达,对肺组织具有保护作用。
【关键词】烟碱;胆碱能抗炎通路;α7亚基烟碱受体;TNF-α;NF-κB
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烟碱是胆碱能受体的天然激动剂,已证明烟碱可以激活胆碱能抗炎通路,抑制炎性反应,对以SIRS为主要特征的疾病有保护作用[1]。但是这一通路激活对ALI/ARDS作用如何尚无报道。本研究拟通过复制ALI/ARDS动物模型,观察烟碱是否具有抗ALI/ARDS作用,及其作用的分子机制。为开发烟碱的治疗用途、寻找ALI/ARDS的新型防治手段提供实验依据。
1 材料与方法
1.1实验动物的制备及分组
健康雄性Wistar大鼠,体重180～250g(由郑州大学实验动物中心提供,批号SCXK豫2005-0001)。32只大鼠随机分为对照组、ARDS组、烟碱处理组(烟碱组)和烟碱加α-银环蛇毒素组(蛇毒素组)共4组,每组8只。大鼠模型的制备参考文献[2]。动物术前禁食12h,腹腔注射20%乌拉坦1g/kg麻醉后,经尾静脉注入油酸0.1ml/kg。对照组麻醉后经尾静脉注入生理盐水0.1ml/kg。烟碱组和蛇毒素组模型制备成功后参考文献[3]立即腹腔注射烟碱400µg/kg,之后每间隔8 h追加注入1次,连续3次至第24小时。对照组和ARDS组则于相应时间点腹腔注射等量生理盐水.
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1.2 检测指标与方法
1.2.1动脉氧分压分析模型制备成功后4 h经颈动脉采集血样1.0 ml,应用血气分析仪测定动脉血氧分压(PaO2)。
1.2.2血浆IL-6浓度测定模型制备成功后4 h通过颈动脉抽血0.8ml,加入EDTA抗凝管;离心(3000×g 4℃)15 min后,取上清保存于-70℃,待检。采用酶联免疫吸附法测定。操作步骤严格按试剂盒说明书进行。以pg/ml表示。每个待测样品及标准品均作复孔检测。
1.3.3 肺组织NF-κB p65的测定石蜡切片上测NF-κB、的免疫组化表达,阳性反应为胞浆中出现棕黄色颗粒。结果判断每张切片在高倍镜下选择2个视野,记数每20个细胞中阳性细胞个数,取其平均值作为该标本的NF-KB染色阳性率。NF-KB细胞阳性率以阴性,阳性,强阳性3个等级表示。
1.4 统计学处理
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采用SPSS 10.0统计软件进行分析处理,资料以均数±标准差(X±s)表示。组间比较采用单因素方差分析,独立样本间采LSD-T检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1氧分压
对照组为(113.5±5.5)mmHg,ARDS组为(83.0±5.2) mmHg,烟碱组为(109.1±7.7)mmHg,蛇毒素组为(82.0±5.3)mmHg。烟碱组与ARDS组及蛇毒素组均值相比差异有统计学意义(P< 0.05)。
2.2 血浆IL-6的浓度
对照组为(193.9±21.5)pg/ml,ARDS组为(354.2±47.6)pg/ml,烟碱组为(220.3±28.0)pg/ml,蛇毒素组为(330.5±33.6)pg/ml。烟碱组血浆IL-6浓度明显低于ARDS组及蛇毒素组,差异有统计学意义(P<0.05)。
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2.3 肺组织NF-κB p65的测定结果
免疫组化示烟碱组NF-κB p65为阳性,ARDS组为强阳性,对照组为阴性,蛇毒素组为强阳性.
3 讨 论
本研究证明烟碱激活胆碱能抗炎通路可明显降低IL-6、NF-κB p65在体内的表达,提高氧分压,减轻肺水肿。对肺组织的保护作用明显,减少了炎症因子的表达,减轻了全身炎症反应,对ALI/ARDS的治疗作用明显。胆碱能抗炎通路的发现为抗炎治疗提供了一条崭新的途径,研究开发安全有效的拟胆碱药物,将是未来研究的热点。
【参考文献】
[1] Lhur Or,Antonsen k,karlsson M,et al.And the ARF study group.incidence and mortality after acute respiratory failure and acute respiratory distress syndrome in sweden,denmark,and Iceland[J].Am J Respir Crit Care Med,1999,159:1849-1861.
[2] 陆月明.油酸致急性肺损伤动物模型析评[J].中华急诊医学杂志,2005,14(1):81.
[3] Hong W,MAN Y, MahendarO,et al. Nicotinic acetylcholine receptor asubunit is an essential regulator of inflammation [J].Nature,2003,421: 384-388, http://www.100md.com(刘鸿飞 李宏云 秦 超)