小柴胡汤对大鼠肝细胞脂肪变性及葡萄糖调节蛋白表达的影响(3)
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参见附件。
2.3.6 肝组织中葡萄糖调节蛋白78 mRNA表达半定量RT-PCR检测 用RNeasy Mini Kits一步法提取肝组织总RNA(方法按说明进行),取RNA样品2 ?g以随机引物进行反转录反应合成cDNA,以cDNA为模板进行PCR扩增。GRP78正义链:5’-TAATCAGCCCACCGTAACAATC-3’,GRP78反义链:5’-ACCTCCCAG CTTCTCTTTATCT-3’;扩增片段为315 bp;反应条件为:94 ℃ 3 min后,94 ℃ 30 s, 59 ℃ 30 s,72 ℃ 45 s,循环24次,最后72 ℃、10 min。GAPDH作为内对照,正义链:5’-CAGTGCCAGCCTCGTCTC AT-3’,反义链5’-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3’;扩增片段为595 bp;反应条件为94 ℃、3 min后,94 ℃、30 s,58 ℃ 30 s,72 ℃、45 s,循环28次,最后72 ℃ 10 min。PCR反应产物经过1%琼脂糖凝胶电泳检测,凝胶成像仪观察拍照。
3 统计学方法
运用SPSS11.0软件包进行统计学分析,计量资料以—x±s表示,组间比较使用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
4 结果
4.1 小柴胡汤对大鼠体质量、肝湿重、肝指数影响(见表1)
表1 各组大鼠体质量、肝湿重、肝指数变化比较(—x±s)
组别只数体质量(g)肝湿重(g)肝指数
正常组5273.20±18 ......
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