超滤法结合高效液相色谱法测定淫羊藿苷的血浆蛋白结合率(2)
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2.5 专属性考察
在上述色谱条件下，淫羊藿苷的保留时间在7.8 min左右，峰形良好，无杂质峰干扰，具有较好的专属性。色谱图见图1。
A
B
C
注：A.空白超滤样品；B.对照品；C.淫羊藿苷超滤样品
图1 淫羊藿苷超滤试验高效液相色谱图
2.6 线性关系考察
精密吸取“2.2”项下浓度为0.562 mg/mL的淫羊藿苷对照品甲醇贮备液，采用梯度稀释的方法制成含淫羊藿苷1.124、2.81、14.05、28.1、56.2、112.4 μg/mL的系列浓度甲醇溶液。分别取上述溶液400 ?L，加入200 ?L PBS溶液，涡旋混合45 s， 12 000 r/min离心10 min，取上清液20 μL，注入高效液相色谱仪，测定。以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为：A=14.432C-6.916，r2=0.999 9。结果表明，淫羊藿苷在2.248～224.8 ?g/mL(折合在缓冲盐中的浓度)范围内线性关系良好，方法的定量下限为2.248 ?g/mL。
2.7 准确度与精密度试验
精密吸取“2.2”项下浓度为0.562 mg/mL的淫羊藿苷对照品甲醇贮备液500、200、40 ?L，加pH 7.4的PBS溶液定容至5 mL，得浓度为56.2、22.48、4.50 ?g/mL的淫羊藿苷缓冲盐溶液，作为高、中、低3个质控样品。精密量取各浓度0.5 mL，分别置超滤管中超滤并处理样品后进样测定，相应峰面积代入随行标准曲线，计算淫羊藿苷的浓度，求得淫羊藿苷的相对回收率。
以1日内5次测得的浓度计算日内精密度，以1周内连续5日测定的浓度计算日间精密度 ......
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