RP—HPLC测定止痛膏中大黄酸、大黄素和大黄酚的含量

http://www.100md.com 2012年7月1日 闵云山 焦正花等

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    参见附件。

     摘要：目的 建立测定止痛膏中大黄酸、大黄素和大黄酚含量的方法。方法 采用反相高效液相色谱法，十八烷基键合硅胶柱分离大黄酸、大黄素和大黄酚，以甲醇-水(85∶15)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长254 nm。结果 大黄酸在0.208～1.040 ?g范围内线性关系良好(r=0.999 0，n=5)，平均加样回收率为98.37%(RSD=0.57%， n=5)；大黄素在0.192～0.96 ?g范围内线性关系良好(r=0.999 7，n=5)，平均加样回收率为98.45%(RSD=0.99%， n=5)；大黄酚在0.596～2.980 ?g范围内线性关系良好(r=0.999 5，n=5)，平均加样回收率为98.18%(RSD=1.50%，n=5)。结论 本方法简单、灵敏、准确、重复性好，可用于该制剂的质量控制。

    关键词：止痛膏；大黄酸；大黄素；大黄酚；反相高效液相色谱法

    中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2012)07-0052-02

    止痛膏为本院院内制剂，由大黄、浙贝母、冰片、木香等中药组成，具有消肿、止痛功效，临床应用30余年。为有效控制该产品的内在质量，保证临床疗效，笔者在原有大黄定性鉴别的基础上，通过试验筛选出了主药大黄的定量测定方法。本试验采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对该制剂中大黄的有效成分大黄酸、大黄素、大黄酚进行含量测定，现报道如下。

    1 仪器与试药

    美国Waters 1525高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器，Bree色谱工作站；天津HS6150型超声波清洗器，METTLER AE240电子天平。

    甲醇(色谱纯)，水为纯净水，大黄酸、大黄素、大黄酚对照品均购自中国药品生物制品检定所(批号分别为0773-9809、0756-9908、796-9302)，止痛膏由本院制剂室提供(批号为20110706、20110519、20110316)。

    2 方法与结果

    2.1 色谱条件

    2.2 对照品溶液的制备

    精密称取大黄酸、大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1 mL分别含104、96、298 ?g的溶液，作为对照品溶液。

    2.3 供试品溶液的制备

    2.4 阴性对照试验

    2.5 线性关系考察

    2.6 精密度试验

    取同一浓度对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样5次，计算峰面积，结果大黄酸RSD=0.85%，大黄素RSD=0.62%，大黄酚RSD=0.58%。表明精密度良好。

    2.7 稳定性试验

    精密吸取新鲜配制的供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样，测定峰面积，大黄酸、大黄素、大黄酚峰面积RSD分别为1.25%、1.56%、1.20%。表明供试品在12 h内稳定性较好。

    2.8 重复性试验

    2.9 加样回收率试验

    2.10 样品含量测定

    3 讨论

    分别取大黄酸、大黄素、大黄酚对照品溶液在200～400 nm波长范围内扫描，结果3种有效成分在254 nm波长处均具有最大吸收，且样品中其他成分在此波长处对测定无干扰，灵敏度高，可同时测定3种成分，故测定波长选定为254 nm。

    本试验参考文献[1]，通过加甲醇超声处理5 min再加硫酸超声，与回流20 min再加硫酸超声比较，然后两步同时采用回流30 min，结果表明，本试验采用的样品处理方法分离度好，无干扰。

    三黄膏制剂以大黄为君药，大黄是甘肃道地药材，大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等均为大黄中的活性成分，由于对照品不足，本试验只测定了3种活性成分的含量，以作为本制剂的质量控制指标。

    本试验结果表明，采用RP-HPLC测定具有便捷、灵敏、准确和重复性好的特点，适用于三黄膏制剂的质量控制。

    参考文献：

    [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：22-23.

    (收稿日期：2011-10-27，编辑：陈静)

    http://www.100md.com/html/paper/1005-5304/2012/07/21.htm

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