+CD25+调节性T细胞和Th17细胞的影响> 益气解毒方对中晚期鼻咽癌患者CD4+CD25(2)
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参见附件。
将PBMC在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中调整细胞密度至2×106细胞/mL，加入50 μg/L佛波醇乙酯、离子霉素和莫能霉素共刺激培养5 h(37 ℃， 5%C02)；用三色标记的CD3、CD4、IL-17抗体对IL-17分子进行细胞因子胞内染色标记，按Human Th17 FlowTM Kit说明书进行操作。采用FC500型流式细胞仪进行检测，测定10 000个细胞，激发波长为488 nm，发射波长为535 nm，分析时设门以除去细胞碎片和细胞团块对测定的干扰。以同型抗体染色作为阴性对照。
2.5 实时聚合酶链反应检测Foxp3与ROR-γt mRNA表达
运用Primer5.0软件设计引物序列，由上海生物工程技术有限公司合成ROR-γt引物。其中Foxp3引物正义链为5’-CACAACATGCGACCCCCTTTCACC-3’，反义链为5’-AGGTTGTGGCGGATGGCGTTCTTC-3’；ROR-γt引物正义链为5’-CCTGGGCTCCTCGCCTGACC-3’，反义链为5’-TCTCTCTGCCCTCAGCCTTGCC-3’；β-actin引物正义链为5’-CATCCTGCGTCTGGACCTGG-3’ ......
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