五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠DNA损伤的影响(2)
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2.2 指标检测
2.2.1 血清中8-羟基脱氧鸟苷测定 末次给予CTX后12 h处死小鼠，眼球取血后静置30 min，3500 r/min离心10 min，分离血清，ELISA测定血清中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。
2.2.2 碱性单细胞凝胶电泳 取出股骨，用PBS冲洗骨髓腔，收集骨髓细胞，过滤，用PBS洗涤2次后，悬浮于PBS中，用细胞计数板计数，将细胞悬液调整至细胞密度为1×106个/mL。在普通载玻片上用玻璃胶粘上小玻璃条，用PBS配制1%的正常熔点琼脂糖，煮沸后取100 μL均匀铺在载玻片上，置于4 ℃，固化5 min即第1层胶，取100 μL于37 ℃水浴中保温的0.5%的低熔点琼脂糖，与100 μL骨髓细胞悬液充分混匀后加入第1层胶上，置于4 ℃，固化5 min即第2层胶。将载玻片浸入新鲜配制的4 ℃的碱性裂解液，4 ℃冰箱内避光裂解2 h。将载玻片从裂解液中取出，用蒸馏水轻轻冲去多余的盐分，将凝胶载玻片放入电泳槽中，加入4 ℃冰箱预冷的电泳液至盖过胶面2～3 cm，避光静置4 ℃解旋20 min。调节电泳仪至电压25 V、电流300 mA，4 ℃避光电泳20 min。电泳结束后，将凝胶载玻片从电泳槽中取出，浸入pH 7.0 Tris-HCl中和液中，每5 min换液1次，中和20 min。在凝胶上滴加溴化乙锭(10 μg/L)100 μL，2 min后用蒸馏水洗涤2次，稍微晾干，尽快在荧光显微镜下进行观察。将染色好的载玻片放在荧光显微镜的40倍镜下观察拍照，采用Casp1.2.3彗星分析软件对彗星图像进行分析。选取彗星图像的Olive尾矩、尾距、尾长和尾部DNA含量进行分析。
3 统计学方法
采用SPSS13 ......
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