HPLC梯度洗脱法同时测定参茸延龄片中补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ含量(2)
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2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：依利特Hypersil C18(4.6 mm×250 mm， 5 ?m)；流速：1.1 mL/min；流动相A为乙腈-甲醇 (2∶1)，流动相B为0.1%冰醋酸溶液[2]，梯度洗脱(0～15 min，38.0%A；15～27 min，38.0%→30.0%A；27～44 min，30.0%A)；检测波长：0～27 min，λ1=246 nm[3-6]，27～44 min，λ2=270 nm[7-10]。此系统条件下所测组分与其他组分分离效果良好，理论塔板数按补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ计均不低于2000，分离度均>1.5。
2.2 混合对照品溶液的制备
精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品、淫羊藿苷对照品和宝藿苷Ⅰ对照品各适量，加50%甲醇制成每1 mL含补骨脂素0.033 2 mg、异补骨脂素0.022 6 mg、淫羊藿苷0.029 4 mg、宝藿苷Ⅰ0.024 2 mg的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取本品适量，除去糖衣，精密称定，研细，取约 1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理(300 W，40 kHz)30 min，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照试验
按参茸延龄片处方比例分别称取除补骨脂和除淫羊藿的其余药味各1份，按参茸延龄片的生产工艺分别制成补骨脂空白样品和淫羊藿空白样品，按供试品溶液制备方法制成补骨脂阴性对照溶液和淫羊藿阴性对照溶液。分别精密吸取10 ?L补骨脂阴性对照溶液、淫羊藿阴性对照溶液、混合对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定。在与补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ对照品色谱图相应的保留时间处，供试品溶液色谱图中有吸收峰，而阴性对照溶液色谱图中未见吸收峰，色谱图见图1。
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