竹节参多糖对肝细胞损伤的影响(2)
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HepG2细胞在培养瓶里生长良好时，加入竹节参多糖不同醇沉部位，浓度为100 μg/mL，然后加入PA，终浓度为500 μmol/L，继续培养24 h后，按Trizol试剂操作说明书抽提肝细胞RNA，测定其浓度，取总RNA 1 μg，按照反转录试剂盒说明书在20 μL反转录反应体系合成cDNA，并进行PCR扩增。葡萄糖调节蛋白(GRP78)：上游5'-TTCCTCCTGCTCCTCGTGG-3'，下游5'-GCGATTCTGGTCATTGGTGATT-3'；结合蛋白同源蛋白(CHOP)：上游5'-AACCAGCAGAGGTCACAAGCAC-3'，下游5'-GCCACTTTCCTTTCATTCTCC TGT-3'；肿瘤坏死因子α(TNF-α)：上游5'-TGGCAGTTTCTGAGCAGTCGT-3'，下游5'-GATTTACCATCCAGCAGGGCTT-3'；Toll样受体4(TLR4)：上游5'-AGACACTTTATTCAGAGCCGTTGG-3'，下游5'-TCCTCCCATTCCAGGTAGGTG-3'；GAPDH：上游5'-ACTTCAACAGCGACACCCACTC-3'，下游5'-TCTCTCTTC CTCTTGTGCTCTTGC-3'。引物由上海生工生物工程技术服务公司合成。PCR参数94 ℃预变性3 min；94 ℃、30 s，55 ℃、30 s，72 ℃、30 s，25～30个循环；最后72 ℃延伸5 min。2%琼脂糖凝胶电泳，采用Gel logic 200凝胶成像分析系统测定平均灰度值 ......
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