竹节参多糖的免疫佐剂活性研究(2)

http://www.100md.com 2014年12月1日 崔倩倩 孙志伟 张长城 王婷 周志勇 何毓敏 刘朝奇 袁丁

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    参见附件。

     2.4 免疫活性测定

    2.4.1 分组与免疫 将30只小鼠随机分为对照组(PBS)、抗原组(OVA)、30%醇沉物+抗原组(30%PSPJ)、60%醇沉多糖+抗原组(60%PSPJ)、90%醇沉多糖+抗原组(90%PSPJ)。各段多糖物用蒸馏水配成相应浓度后，用0.22 μm微孔滤膜过滤。各组小鼠分别给予相应药物及抗原，第1日皮下注射，第8、15日分别腹腔注射，体积均为200 μL，相当于抗原量每只0.15 mg/mL，用药量每只1.5 mg/mL。最后1次免疫后5 d，处死小鼠取血，测定抗体效价。

    2.4.2 抗体滴度检测 用包被液稀释抗原至浓度为2 μg/mL，每孔加100 μL，4 ℃孵育16 h；移去包被液，用PBST洗1次，时间为3 min；每孔加1%BSA 200 μL， 37 ℃孵育1 h；移去封闭液，用PBST洗3次，每次3 min；用1%BSA稀释血清标本至所需浓度(1∶2000、1∶20 000)，每孔加100 μL，37 ℃孵育1 h；移去上清液，用PBST洗3次，每次3 min；用1%BSA按1∶3000稀释二抗，每孔加100 μL，37 ℃孵育1 h；移去上清液，用PBST洗5次，每次3 min；加入A、B显色液各50 μL，室温避光反应10～15 min；最后每孔加入50 μL终止液(2 mol/L H2SO4)终止反应；3 min内于酶标仪上检测OD450值。

    3 结果

    3.1 竹节参多糖含量

    3.1.1 线性关系考察 将对照品准确稀释 ......

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