苍附苁仙汤对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞胰岛素样生长因子—1受体基因表达的影响(2)
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1.7 观察指标及方法
1.7.1 血清生殖激素测定 采用化学发光微粒子免疫法测定HCG日血清LH、E2、P水平，试剂盒由美国ARCHITECT公司提供，按试剂盒说明书同批专人操作。
1.7.2 胚胎质量和优质胚胎率 从形态学角度将胚胎质量分为4级。1级：胚胎卵裂球均匀规则，胞浆均质透明，胚胎无或仅有极少量碎片(<5%)；2级：卵裂球不甚均匀规则，胞浆折光性有轻微改变，卵裂球碎片占10%～25%；3级：胚胎卵裂球不均欠规则，卵裂球碎片占25%～50%；4级：胚胎卵裂球严重不均，形态不规则，卵裂球碎片>50%。胚胎质量≤2级为优质胚胎，>2级且≤3级为可移植胚胎，4级为弃胚。优质胚胎率(%)=优质胚胎数÷胚胎数×100%。
1.7.3 胰岛素样生长因子-1受体mRNA检测 采用实时荧光定量PCR。阴道B超指引下行穿刺取卵术，留取直径18～20 mm的优势卵泡的卵泡液。1500 r/min离心10 min，留取沉淀。在沉淀物中加入PBS至5 mL制成混悬液。另取15 mL离心管，加入人淋巴细胞分离液5 mL，将混悬液缓慢加入淋巴细胞分离液的液面上，1200 r/min离心20 min，吸取在两液面之间的颗粒细胞层，加PBS，3000 r/min离心5 min，下层即为壁颗粒细胞。采用Trizol(Invotrigen公司，美国)一步法提取颗粒细胞总RNA。各组取2 μg总RNA进行反转录，然后分别以人GAPDH、INSR、IGF-1R的特异性引物进行PCR反应。引物序列采用GenBank数据库中提供的基因序列，用DNAman version 6软件设计 ......
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