消痰散结方对人结直肠癌HCT116细胞增殖和凋亡及Caspase3蛋白表达的影响(2)
1.5.3 Western blot检测Caspase3蛋白表达 细胞裂解后按产品说明用BCA法测定蛋白浓度,等量的蛋白样品(40 μg)经10%SDS-PAGE电泳分离后,转印至PVDF膜上,5%脱脂奶粉封闭液室温封闭2 h,鼠抗人β-actin一抗按1∶5000稀释,兔抗人Caspase3一抗按1∶1000稀释,4 ℃孵育过夜;TBST洗膜3次后,加入1∶2000稀释的HRP标记羊抗鼠或羊抗兔二抗,室温孵育1 h,TBST再次洗涤3次,加入ECL发光底物,在凝胶成像系统中成像、摄图。重复3次。1.6 统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行分析。计量资料以—x±s表示,对细胞OD值进行曲线拟合,计算IC50;Levene法检验方差齐性,方差齐单因素多水平比较采用Dunnett-t检验,各药物浓度组在不同时点的细胞OD值比较采取重复测量的两因素多水平方差分析;方差不齐,采用多样本非参数Kruskal-Wsllis H检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 消痰散结方对HCT116细胞增殖的影响
消痰散结方作用72 h ......
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