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编号:12595741
化浊颗粒对2型糖尿病大鼠磷脂酰肌醇3激酶和葡萄糖转运蛋白4基因表达的影响(3)
http://www.100md.com 2015年7月1日 中国中医药信息 2015年第7期
     2.7.3 总RNA反转录 反应体系为20 ?L,总RNA量为100 ng,建立反转录反应体系。试剂确定为5×PrimeScript RT Master Mix、总RNA、Rnase Free dH2O,加入量分别为4、4、12 ?L,反转录反应条件为37 ℃、15 min,85 ℃、5 s,冷却至4 ℃。然后混匀并离心,进行反转录反应为cDNA。

    2.7.4 RT-PCR检测各组目标基因表达水平 取反转录完成的cDNA,专用SYBR Green荧光染料, RNase-free灭菌水和目的基因引物,引物序列如下:β-actin上游引物5'-AATTACTCCCTCTCCTA-3',下游引物5'-ACTCATCTACTCCTCTTCT-3';PI-3K上游引物5'-ACTCCTAAGCCATTAAA-3',下游引物5'-ATCCAATA CTTTA-3’;GLUT4上游引物5'-TTGCAGTGCCTGAGTC TTCTT-3' ......
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