归芪多糖对早衰WI—38细胞端粒酶活性的影响(2)
2 实验方法
2.1 分组
含10%胎牛血清的H-DMEM完全培养基培养细胞生长至90%融合时，按照1∶4进行传代培养。所有细胞均采用传自18代的WI-38细胞。GQP组GQP先作用2 h后H2O2作用2 h，模型组H2O2作用2 h，每日1次，连续4次。正常组常规培养细胞，不做任何处理。
2.2 WI-38早衰细胞模型建立
2.2.1 剂量-效应曲线确定H2O2染毒剂量 90%融合单层WI-38细胞(18代)0.25%胰蛋白酶消化后，调整细胞悬液密度，接种至96孔板中，每孔接种8×103个，孵育24 h后进行染毒。H2O2染毒剂量分别为1、10、100、200、400、800、1600、3200、6400 μmol/L，每个剂量设6个复孔。染毒2 h后MTT法检测。
2.2.2 过氧化氢诱导早衰WI-38细胞 将长至90%融合的单层WI-38细胞(18代)消化后接种于6孔板中，随机分为H2O2组和空白对照组，每组3孔。另外接种55代的细胞3个孔作为复制衰老组。H2O2组以100、200、400 μmol/L H2O2染毒2 h后继续完全培养基培养 ......
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2.1 分组
含10%胎牛血清的H-DMEM完全培养基培养细胞生长至90%融合时，按照1∶4进行传代培养。所有细胞均采用传自18代的WI-38细胞。GQP组GQP先作用2 h后H2O2作用2 h，模型组H2O2作用2 h，每日1次，连续4次。正常组常规培养细胞，不做任何处理。
2.2 WI-38早衰细胞模型建立
2.2.1 剂量-效应曲线确定H2O2染毒剂量 90%融合单层WI-38细胞(18代)0.25%胰蛋白酶消化后，调整细胞悬液密度，接种至96孔板中，每孔接种8×103个，孵育24 h后进行染毒。H2O2染毒剂量分别为1、10、100、200、400、800、1600、3200、6400 μmol/L，每个剂量设6个复孔。染毒2 h后MTT法检测。
2.2.2 过氧化氢诱导早衰WI-38细胞 将长至90%融合的单层WI-38细胞(18代)消化后接种于6孔板中，随机分为H2O2组和空白对照组，每组3孔。另外接种55代的细胞3个孔作为复制衰老组。H2O2组以100、200、400 μmol/L H2O2染毒2 h后继续完全培养基培养 ......
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