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编号:12729652
地黄饮子对β淀粉样蛋白1—42致SH—SY5Y细胞线粒体损伤及细胞凋亡的影响(3)
http://www.100md.com 2015年12月1日 《中国中医药信息》 2015年第12期
     1.9 caspase-3、caspase-9酶活性测定

    SH-SY5Y细胞以1×105个细胞/mL接种于6孔板,药物作用后,冰浴裂解细胞。BCA法测定蛋白浓度,按照试剂盒说明书,于酶标仪405 nm处测定光密度值。

    1.10 Western blot检测Bcl-2、Bax表达

    SH-SY5Y细胞以1×105个细胞/mL接种于6孔板,药物作用后,弃培养液,用含蛋白酶抑制剂的细胞裂解液冰上裂解细胞,提取细胞蛋白。BCA法测定蛋白浓度,50 μg蛋白上样,10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后,转至PVDF膜,含5%脱脂奶粉的封闭液封闭1.5 h,加入相应稀释比例的第一抗体,4 ℃孵育过夜。PBST洗膜后,与辣根过氧化物酶标记的第二抗体室温下孵育1.5 h,PBST洗膜,ECL发光液处理,GeneGenome ECL成像仪检测,以β-actin为内参。美国NIH Image J软件分析蛋白条带光密度值 ......
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