三波长分光光度法可有效消除光谱吸收峰不对称给定量分析造成的干扰，校正基于干扰组分的吸收光谱具有线性吸收产生的基线倾斜[21]。药用百合总黄酮[22]的含量测定中，以芦丁为对照品，采用AlCl3显色，在200～600 nm波长范围内紫外扫描绘制吸收曲线，作图法确定3个波长为245、323、420 nm，分别测定其吸光度，计算ΔA，以空白试剂参比，依标准曲线计算总黄酮的含量。该方法结果准确可靠，适用于药用百合中总黄酮的含量测定。三波长分光光度法在排除被测物的干扰、提高测定的准确度和灵敏度方面具有优势。

    1.4 直接测定法

    黄酮类化合物结构各异，某些黄酮应用常规的显色剂在特定的波长下并未出现相应的吸收，或与对照品吸收曲线峰形和最大吸收波长差异较大。近年来，许多研究者采用紫外-可见分光光度法直接测定某些药材中总黄酮的含量。笔者在黄芪和红芪总黄酮的测定中以药材中所含的毛蕊异黄酮葡萄糖苷为对照，在260 nm波长处直接测定总黄酮的含量，方法学验证符合含量测定的要求[23]。川麦冬总黄酮[24]、陈皮总黄酮[25]等含量测定均采用直接测定法。

    紫外-可见分光光度法虽然专属性不强，未必能客观反映药材中总黄酮的真实含量，但在现阶段技术水平下 ......