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编号:13229110
电针对糖尿病周围神经病变大鼠脊髓脂氧合酶的影响(3)
http://www.100md.com 2018年5月1日 《中国中医药信息杂志》 2018年第5期
     RT-PCR检测脊髓LOX基因表达。组织总RNA提取:冰浴取出新鲜脊髓背角组织,每50~100 mg组织加1 mL Trizol试剂,冰浴超声匀浆15~20 s;每1 mL Trizol试剂加0.2 mL氯仿,快速震荡15 s,冰浴5 min,4 ℃、12 000×g离心15 min;加入等体积预冷异丙醇,混匀,冰浴15 min,4 ℃、12 000×g离心10 min,弃上清液,吸干异丙醇;加入75%乙醇,重悬沉淀,4 ℃、7500×g离心8 min,弃上清液,消毒滤纸上吸干乙醇;重复以上步骤,倾去乙醇,空气干燥;干燥后将沉淀溶于DEPC水,置于70 ℃贮存,沉淀加乙醇于20 ℃贮存;取4 μL总RNA溶液稀释至1 mL,紫外分光光度计检测OD260和OD280值,测定其浓度和纯度。

    反转录合成cDNA第一链:PCR管中依次加入Total RNA、Oligo(dT)15 primer、DEPC H2O (RNase-free),70 ℃变性5 min,冰浴5 min;随后加入5×M-MLV Reaction buffer、10 mmol/L dNTPs、RNase inhibitor、M-MLV Reverse Transcriptase、DEPC H2O ......
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