肝胃百合汤对慢性应激与幽门螺杆菌双重损伤因素模型小鼠胃黏膜组织TFF1、p-ERK蛋白表达的影响(3)
1.7 HE染色石蜡包埋,切片,脱蜡,水洗,置于苏木素染液中浸染2~4 min,水洗;使用1%盐酸分化约10 s,水洗;流水冲洗5~l0 min,当细胞核由淡紫红色变为蓝色后,伊红染液中浸染30 s,梯度乙醇脱水,二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明,中性树胶封片,光镜下观察。
1.8 胃黏膜组织三叶因子1、磷酸化细胞外信号调节激酶蛋白表达检测
采用免疫组化法。石蜡切片脱蜡至水,二甲苯中浸泡2次,每次10 min,梯度乙醇(100%、95%、85%、75%)放置5 min,蒸馏水浸洗5 min;枸橼酸盐缓冲液(pH 6.0)微波炉加热修复抗原,冷却后PBS冲洗3次×3 min;3%H2O2浸泡10 min灭活内源性酶。PBS冲洗3次×3 min,分别滴加p-ERK、TFF1一抗。4 ℃过夜。PBS冲洗3次×5 min;滴加二抗37 ℃孵育30 min,PBS冲洗3次×5 min;滴加DAB显色剂显色,室温孵育1~5 min,镜下控制反应时间,蒸馏水洗涤;苏木素复染5~10 min,蒸馏水冲洗,PBS返蓝;梯度乙醇脱水 ......
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