1.10 Western blot检测脑组织p-cAMP反应元件蛋白、p-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ、钙活化调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ、cAMP反应元件蛋白和钙调蛋白的蛋白表达

    大鼠断头取脑后制成匀浆，严格按照蛋白提取试剂盒说明书进行操作，提取脑组织全蛋白，测定蛋白浓度。SDS-PAGE凝胶分离蛋白，经PVDF膜转膜，再用脱脂牛奶封闭2 h。分别加p-CREB、p-CaMKⅡ、CREB、CaMKⅡ抗体(1∶1000)及CaM抗体(1∶500)，4 ℃孵育过夜，TBST洗涤3次×10 min，洗涤后加入经HRP标记的羊抗兔二抗(1∶5000)，孵育2 h，再用TBST液洗涤3次×10 min。完毕后条带经Bio-RAD凝胶分析仪进行图像扫描分析，灰度值用Quantity One测定。分别用p-CREB、p-CaMKⅡ、CaMKⅡ、CREB与β-actin灰度值的比值表示p-CREB、p-CaMKⅡ、CaMKⅡ、CREB和CaM蛋白相对表达量。

    1.11 统计学方法

    采用SPSS 20.0统计软件进行分析 ......