2.3.5 RT-PCR检测Smad7 mRNA的表达

    引物序列取自NCBI Nu-cleotide Database数据库，经Primer软件设计与检验，大连宝生物工程有限公司合成。Smad7上游：5'-AGAAGATATCCAGGGAGG GCTCTT-3'，下游：5'-CGCTGTACCTTCCTCCGAT-3'，产物长度182 bp；β-actin上游：5'-GCCCCTGAGGA GCACCCTGT-3'，下游：5'-ACGCTCGGTCAGGATCT TCA-3'，产物长度300 bp。取大鼠肾组织30 mg，按总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒及扩增试剂盒说明书分别提取各组总RNA及反转录合成cDNA模板，取2 μL cDNA用于RT-PCR。β-actin mRNA作为内参照。反应条件：94 ℃、30 s，95 ℃、20 s，57 ℃、30 s，72 ℃、60 s 45个循环；95 ℃、30 s，60 ℃、60 s，95 ℃、30 s。在每个循环延伸末收集荧光信号，绘制扩增曲线，检测各样本的阈值循环数(CT值) ......