2.3.2 TUNEL法检测肝细胞凋亡

    石蜡切片常规脱蜡和脱水，严格按照试剂盒说明书进行操作。切片在荧光显微镜下观察，以胞核被标记上绿色荧光的细胞作为凋亡细胞，每张切片400倍镜下选择3个阳性视野，计数200个细胞中阳性细胞数作为阳性细胞数。

    2.3.3 实时荧光定量PCR检测肝组织JNK1、p-c-Jun、Caspase-8 mRNA表达

    取约100 mg肝组织，用Trizol法提取总RNA;取1 μg RNA样品，经超微量分光光度计测定样品的浓度(ng/μL)。检测A₂₆₀/A₂₈₀为1.8～2.1，提示RNA质量较好。取3 μL RNA样品用于合成cDNA。按RT-PCR试剂盒说明书对JNK1、p-c-Jun、Caspase-8基因进行PCR扩增，采用两步法PCR反应程序(体积20 μL)：95 ℃、120 s，40 个循环;95℃、20 s，60 ℃、60 s。检测所需引物根据标准RT-PCR引物设计原则，由宝生物(大连)工程有限公司设计并合成(见表1)。靶基因相对表达量用2^-ΔΔCt法计算。

    2.4 Western blot检测肝组织JNK1、p-JNK1、p-c-Jun、Caspase-8蛋白的表达

    取1 g左右冷冻组织样本 ......