半夏泻心汤联合IL-12转染骨髓间充质干细胞对胃癌荷瘤裸鼠抑瘤作用研究(3)
2 实验方法2.1 LV5空载慢病毒及LV5-IL-12过表达慢病毒转染骨髓间充质干细胞
取对数生长期BMSCs，PBS清洗，胰蛋白酶(0.25%EDTA)消化细胞3 min，收集细胞15 mL置于离心管，离心5 min重悬细胞，培养板加入细胞悬液，使每孔细胞约为5×105个，置于细胞培养箱培养。当铺板时细胞融合率约为50%，每孔培养基体积为100 μL，融合度约为70%时，细胞生长状态较好。取出病毒，4 ℃冰箱保存，离心20 s，PBS清洗2次，取出离心后的病毒和细胞，使用移液器吸取准确体积病毒液加入准备好的培养基，吸去原细胞培养瓶中培养基，在目的细胞中加感染复数(MOI值)为50的LV5空载慢病毒及LV5-IL-12过表达慢病毒病毒液200 μL，同时每孔按8 μg/mL加入适量的聚凝胺，混匀，置于37 ℃、5%CO2培养箱孵育过夜。8 h后更换完全培养基培养，分别于转染48、72 h后 ......
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