P<0.01)， and the expressions of TLR4 and NF-κB in cartilage increased (P<0.01). Compared with the model group， the pathological damage of rabbit articular cartilage of TCM group was alleviated， and the levels of TNF-α， IL-1β， and IL-6 decreased to different degrees (P<0.05， P<0.01). The protein expressions of TLR4 and NF-κB also decreased significantly (P<0.05， P<0.01). Conclusion Huoxue Huayu Mixture can alleviate the damage of articular cartilage in rabbit model with knee osteoarthritis， and its mechanism may be related to inhibiting TLR4/NF-κB pathway and reducing the level of inflammatory factors.
, 百拇医药
Keywords： knee osteoarthritis; Huoxue Huayu Mixture; inflammatory factors; articular cartilage; TLR4/NF-κB pathway; rabbits
膝骨性關节炎是由于膝关节局部损伤、炎症或慢性劳损引起的软骨变性及活动障碍的慢性退行性骨关节病，常见于中老年人，我国55～64岁人群中患病率高达49%[1]。目前，膝骨性关节炎发病机制尚未完全阐明，通常认为炎症因子在其发生发展过程中起到关键作用。炎症因子过度表达能导致骨基质降解酶的大量释放，引起软骨组织损伤[2-3]。TLR4/NF-κB通路作为天然免疫模式识别，介导炎症因子的表达，在多种免疫性疾病的发生发展过程中起着重要作用[4]。活血化瘀合剂由当归、赤芍、姜黄3味中药组成，前期临床研究证实其治疗膝骨性关节炎疗效显著[5]，但作用机制尚不明确。本研究采用新西兰兔建立膝骨性关节炎模型，观察活血化瘀合剂对软骨组织病理形态及炎症因子表达的影响，从免疫相关的TLR4/NF-κB通路着手，明确其治疗膝骨性关节炎的具体分子机制，为其临床应用提供依据。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 动物
42只清洁级健康新西兰兔，5月龄，体质量2.0～2.5 kg，雌雄各半，湖南中医药大学实验动物中心代购，动物许可证号SYXK(湘)2015-0006。饲养于湖南中医药大学实验动物中心，温度(24±2)℃，相对湿度(65±10)%，光照12 h，噪声<60 dB标准环境，自由摄食饮水。
1.2 药物
活血化瘀合剂(当归10 g，赤芍10 g，姜黄10 g)，饮片均购自湖南中医药大学第一附属医院，全方煎煮2次，合并煎液，浓缩至含1.3 g原药材/mL，4 ℃冰箱保存备用。硫酸氨基葡萄糖，新兴同仁药业有限公司，批号71610152。
1.3 主要试剂与仪器
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒(武汉华美生物，CSB-E09315Rb)，白细胞介素(IL)-1β试剂盒(武汉华美生物，CSB-E06896Rb)、IL-6试剂盒(武汉华美生物，CSB-E06903Rb)，TLR4一抗(美国CST，14358S)，核因子-κB(NF-κB)一抗(美国CST，8242S)，二抗(武汉博士德，BM3243)。切片机(德国Leica，RM223)，倒置光学显微镜(德国Leica，DMi1)，凝胶成像仪(德国Bio-Rad，ChemiDoc XRS+)，酶标仪(美国Thermo Fisher Scientific，MK3)。, http://www.100md.com(余毅 潘波 杨冬梅 祝家乐 赵洪庆 王芊芊 卢敏 余望贻)