黄连-大黄-肉桂复方及其组分对人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞增殖的影响(3)
2.4 肝癌HepG2细胞增殖测定以抑制SMMC-7721细胞增殖的复方IC50和组分作用于HepG2细胞24、48 h,MTT法检测其对HepG2细胞增殖的抑制作用。
2.5 实时荧光定量PCR检测相关基因表达
选择对数生长期SMMC-7721和HepG2细胞,常规消化后接种至6孔板,每孔3×105个细胞。按处理因素不同,设置对照组、复方组、组分组,分别给予0.1%DMSO、复方(0.86 mg/mL,含0.1%DMSO)和组分(小檗碱、大黄素、桂皮醛终浓度分别为44、23、46 μmol/L,含0.1%DMSO)。给药24 h后,吸弃培养液,收集细胞,Trizol法提取总RNA,并用Prime Script RT reagent Kit将mRNA反转录成cDNA,反应条件:37 ℃、15 min,85 ℃、5 s。cDNA用SYBR Premix试剂进行实时荧光定量PCR,扩增条件:95 ℃、3 min;95 ℃、30 s ......
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