血府逐瘀汤诱导内皮祖细胞对心肌缺血模型大鼠缺血区血管新生的影响
汀组,低剂量,1实验材料,1动物,2药物及制备,3主要试剂与仪器,2实验方法,1骨髓源内皮祖细胞原代分离及培养,2免疫荧光鉴定内皮祖细胞,3荧光标记内皮祖细胞,4心肌缺血模型建立,5分组及给药,6
李蕾,何莉,苏畅,梁昊,张秋雁,杨漾,谢辉,谭精培血府逐瘀汤诱导内皮祖细胞对心肌缺血模型大鼠缺血区血管新生的影响
李蕾,何莉,苏畅,梁昊,张秋雁,杨漾,谢辉,谭精培
湖南中医药大学,湖南 长沙 410208
观察血府逐瘀汤诱导内皮祖细胞(EPCs)对心肌缺血模型大鼠缺血区血管新生的影响,探讨其作用机制。采用结扎冠状动脉左前降支方法制备急性心肌缺血模型。实验大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、他汀组和血府逐瘀汤低、中、高剂量组。造模后将荧光标记的EPCs尾静脉注射植入模型大鼠体内,成模后灌胃给药,给药第3日和第7日分别采血,取材缺血坏死部位肉芽组织和肌肉组织,行冰冻切片分析荧光表达,HE染色观察样本坏死病变情况,免疫组化检测心肌组织CD106、CD146的表达,计数新生血管数量,硝酸还原酶法检测血清和心肌缺血区一氧化氮(NO)表达。与模型组比较,血府逐瘀汤各剂量组均能促进EPCs迁移至大鼠心肌缺血区,提高CD106、CD146的表达,促进心肌缺血区血管新生,明显升高血清和心肌组织NO含量,差异均有统计学意义(<0.01),血府逐瘀汤高剂量组效果最佳。血府逐瘀汤可诱导EPCs促进心肌缺血区血管新生,其作用机制与促进内皮细胞CD106、CD146表达及升高血清和心肌组织NO水平有关。
血府逐瘀汤;内皮祖细胞;血管新生;一氧化氮;大鼠
缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)是由于冠状动脉循环改变引起的冠状动脉血流供应与心肌需求之间不能平衡所导致的心肌损害。在心肌缺血或梗死早期,毛细血管密度增加,坏死细胞释放一系列促血管生成因子生成新的旁路,改善心肌的缺血状态。内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是血管内皮的前体细胞,在成体血管新生中发挥着重要作用[1]。在生理或病理因素等刺激下,EPCs从骨髓动员到外周血,在体内缺血组织中整合形成新生血管的前体细胞,外源EPCs治疗冠心病已从基础研究推广至临床,能明显改善心肌梗死和介入手术患者的预后[2-4]。血府逐瘀汤是治疗缺血性心脏病的代表方,近年来,大量临床和实验研究表明,其具有较好的抗心肌缺血的作用[5]。中医祛瘀生新理论是在活血化瘀基础上的进一步认识和深化。其中,抗血小板、扩张冠状动脉、改善血液流变等作用属“祛瘀”之功,而促进血管新生则为“生新”之效。EPCs在冠心病的发生、发展中扮演着重要角色[6]。本实验通过将荧光标记的EPCs尾静脉注射植入急性心肌缺血模型大鼠体内,探讨血府逐瘀汤诱导EPCs参与心肌缺血区血管新生的作用机制 ......
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