王海永，张晨月，李佳，部帅，李成，赵成龙

    蟾毒灵抑制肝癌干细胞lncRNAs分子筛选研究

    王海永1，张晨月2，李佳3，部帅4，李成1，赵成龙1

    1.山东省肿瘤防治研究院，山东 济南 250117；2.复旦大学附属肿瘤医院，上海 200032；3.郑州大学附属肿瘤医院，河南 郑州 450003；4.山东中医药大学第二附属医院，山东 济南 250001

    观察蟾毒灵对肝癌干细胞的影响，并探讨其相关机制。方法 利用无血清悬浮培养技术富集肝癌干细胞球，分子生物实验检测肿瘤干细胞标记物CD133、CD44和上皮特异性抗原(ESA)表达，测序技术筛选蟾毒灵干预肝癌干细胞后lncRNAs分子的差异表达。结果 通过无血清悬浮培养方法成功富集肝癌干细胞球，进一步发现蟾毒灵可抑制肝癌干细胞球的形成；蟾毒灵能显著抑制肝癌干细胞标记物CD133、CD44和ESA表达；测序结果显示，蟾毒灵可引起肝癌干细胞lncRNAs分子的差异表达。结论 蟾毒灵具有抑制肝癌干细胞的作用，其机制可能与调控lncRNAs分子有关。

    蟾毒灵；肝癌干细胞；长链非编码RNA

    肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全球恶性程度最高的肿瘤之一[1]。由于其症状不明显且具有非特异性，大多数HCC患者就诊时已处于晚期，因而失去最佳治疗时机。迄今为止，HCC发生发展的机制仍未完全明确[2]。研究表明，肝癌干细胞在促进HCC发生发展中扮演重要角色，HCC的复发与肝癌干细胞的浸润密切相关[3]。

    肿瘤干细胞的调控过程十分复杂。研究表明，长链非编码RNA(lncRNA)可通过多种机制调控不同种类肿瘤中的干细胞[4]。lncRNA是一组至少具有200个碱基但不具备翻译蛋白质功能的转录本，可通过与miRNA、mRNA和蛋白质的相互作用调节基因表达[5]。lncRNA具有促进和抑制肿瘤发生发展的双重作用。研究表明，降低lncRNA H19表达可逆转CD133+肿瘤干细胞所致化疗耐受性[6]。此外，lncRNA HOTTIP可通过调控Wnt/catenin通路影响胰腺癌干细胞的特性[7]。

    蟾毒灵可在抑制肝癌血管生成、侵袭和转移及诱导肝癌细胞凋亡等方面发挥作用[8-10]，然而，其对肝癌干细胞的作用及其与lncRNAs的相关性鲜有报道。本研究观察蟾毒灵对肝癌干细胞的影响，并筛选其可能调控的lncRNAs分子。

    1 实验材料

    1.1 细胞和药物

    人肝癌细胞PLC/PRF/5 ......