李龙妹，廖桂雅，吴万垠

    扶正抗癌方通过M2型巨噬细胞来源的外泌体途径抑制95D细胞转移的作用机制研究

    李龙妹，廖桂雅，吴万垠

    广州中医药大学第二附属医院，广东省中医院，广东 广州 510370

    观察经扶正抗癌方预处理的M2型巨噬细胞来源的外泌体对95D细胞侵袭和迁移的影响，探讨其经外泌体途径抑制95D细胞转移的分子机制。利用佛波酯诱导人外周血单核细胞THP-1为巨噬细胞(Mφ组)，利用重组人白细胞介素(IL)-4、重组人IL-13诱导THP-1细胞极化为M2型巨噬细胞(Mφ+IL-4+IL-13组)，Western blot检测巨噬细胞标志物CD206、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和转化生长因子-β(TGF-β)表达；差速离心法提取外泌体，透射电镜观察外泌体形态，Western blot检测外泌体标志物溶酶体相关膜蛋白-3(CD63)和肿瘤易感基因101(TSG101)蛋白表达；设置M2型巨噬细胞外泌体组(M2-exo组)和经扶正抗癌方(1.5 mg/mL)预处理24 h的M2型巨噬细胞外泌体组(FZKA-M2-exo组)，Transwell实验和划痕实验分别检测95D细胞侵袭和迁移能力，RT-qPCR和Western blot分别检测E盒结合锌指蛋白(ZEB1)、E-钙黏素(E-cadherin)、N-钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA和蛋白表达。与Mφ组比较，Mφ+IL-4+IL-13组CD206和TGF-β表达均显著升高(<0.05，<0.01)，iNOS表达显著降低(<0.01)。提取外泌体后，透射电镜观察可见膜性微囊泡结构物，且外泌体标志物CD63和TSG101蛋白表达均升高。与M2-exo组比较，FZKA-M2-exo组穿过Transwell小室细胞数量显著减少，光密度显著降低(<0.01)，划痕24 h后，划痕宽度明显增加(<0.01)，ZEB1、N-cadherin和Vimentin mRNA和蛋白表达显著降低(<0.01)，E-cadherin mRNA和蛋白表达显著升高(<0.01)。扶正抗癌方可通过M2型巨噬细胞来源的外泌体途径抑制细胞上皮-间质转化进程，进而抑制95D细胞转移。

    扶正抗癌方；细胞转移；巨噬细胞；外泌体；上皮-间质转化

    前期临床研究表明，扶正抗癌方联合吉非替尼可延长表皮生长因子受体突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者无进展生存时间，对吉非替尼具有增敏、减毒作用[1-2]。同时发现，扶正抗癌方联合吉非替尼能通过激活多条通路抑制NSCLC细胞增殖、促进凋亡、逆转耐药等[3-8] ......