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编号:374476
补肾益髓方对脂多糖诱导的BV2细胞神经炎症模型miRNA-155信号通路相关因子的影响
http://www.100md.com 2021年12月15日 中国中医药信息杂志 2021年第12期
胶质,培养液,1实验材料,1动物与细胞,2药物及制备,3主要试剂与仪器,2实验方法,1补肾益髓方药物血清制备,2体外炎症模型建立,3CCK-8法检测细胞活力,4免疫荧光检测
     高延芳,查政,薛冰,李君玲,齐放,金良韵,张楠,樊永平,王蕾

    补肾益髓方对脂多糖诱导的BV2细胞神经炎症模型miRNA-155信号通路相关因子的影响

    高延芳1,查政1,薛冰2,李君玲1,齐放1,金良韵2,张楠1,樊永平3,王蕾1

    1.首都医科大学中医药学院,中医络病研究北京市重点实验室,北京 100069;2.首都医科大学中心实验室,北京 100069;3.首都医科大学附属北京天坛医院,北京 100070

    观察补肾益髓方药物血清对小鼠小胶质细胞BV2神经炎症的影响,探讨其可能的作用机制。1 μg/mL脂多糖(LPS)诱导建立BV2细胞炎症模型,将BV2细胞随机分为正常组、LPS组、补肾益髓方药物血清(5%、10%、20%)组和空白血清(5%、10%、20%)组,CCK-8法检测细胞活力;在此基础上,将细胞分为正常组、LPS组和20%补肾益髓方药物血清组,免疫荧光法和Western blot检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arginase-1)蛋白表达,RT-qPCR检测细胞内miRNA-155-5p表达;采用慢病毒转染制备miRNA-155-5p过表达模型,另设20%补肾益髓方药物血清组、阴性对照组和miRNA-155-5p过表达组,免疫荧光法和Western blot检测细胞内iNOS、Arginase-1及CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)蛋白表达。与正常组比较,LPS组细胞活力显著降低(<0.01),iNOS和miRNA-155-5p水平显著升高(<0.01),Arginase-1表达显著降低(<0.05);与LPS组比较,20%补肾益髓方药物血清组细胞活力显著升高(<0.01),iNOS和miRNA-155-5p水平显著降低(<0.01),Arginase-1表达显著升高(<0.01)。与20%补肾益髓方药物血清组比较,miRNA-155-5p过表达组iNOS表达显著升高(<0.01),Arginase-1和C/EBPβ表达显著降低(<0.01)。补肾益髓方可抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应,其作用机制与提高细胞活力、上调Arginase-1表达、下调iNOS表达、抑制miRNA-155信号通路有关。

    补肾益髓方;神经炎症;BV2细胞;脂多糖;miRNA-155信号通路

    多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种自身免疫介导的中枢神经系统(CNS)慢性炎症退行性疾病,以炎症、脱髓鞘和轴突损伤为主要病理特征,临床表现为肢体无力、麻木疼痛 ......

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